试验项目：黄酮提取.pptVIP

实验项目： 木芙蓉花中有效成份提取与性能研究 主讲教师：倪明 一、目的与要求 ? 1 ．了解植物中有效成份的药用价值。 ? 2 ．掌握植物中有效成份的提取及其测定方法。 ? 3 ．掌握抑制亚硝化反应的操作与方法。 二、实验原理与相关知识 ? 黄酮类化合物泛指两个具有酚羟基的苯环（ A- 与 B- 环）通过中央三碳原子相互连结而成的一系列 化合物，其基本母核为 2- 苯基色原酮。是一大类 以苯色酮环为基础的酚类化合物。植物中由苯丙 氨酸产生的肉桂酰辅酶 A ，经碳链延长环化生成 的查耳酮，再衍生成的各种 α - 苯基衍生物。 O O A B 2- 苯基色原酮 二、实验原理与相关知识 黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲氧基、甲基、异戊烯基等 官能团。此外，它还常与糖结合成苷。天然黄酮类化合物多以苷类形 式存在，并且由于糖的种类、数量、联接位置及联接方式不同可以组 成各种各样黄酮苷类。组成黄酮苷的糖类包括单糖、双糖、三糖和酰 化糖。黄酮苷固体为无定形粉末，其余黄酮类化合物多为结晶性固体。 黄酮类化合物不同的颜色为天然色素家族添加了更多色彩。这是由于 其母核内形成交叉共轭体系，并通过电子转移、重排，使共轭链延长， 因而显现出颜色。黄酮苷一般易溶于水、乙醇、甲醇等极性强的溶剂 中；但难溶于或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。糖链越长则水溶度越 大。黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性。酸性强弱因酚 羟基数目、位置而异。黄酮类化合物广泛存在于天然产物中，大多具 有明显的抗炎、抗菌、生物抗氧化性、抗衰老、降血脂、治疗心血管 疾病等功能。其中有些可用于心血管病的治疗。 二、实验原理与相关知识 植物单宁 (Vegetable tannins) ，又称植物多酚 (Plant Polyphenol) 为多羟基苯， 如苯二酚、苯三酚等，是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物。在维管 植物中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素，广泛存在于植物的皮、根、 叶、果中，含量可达 20% 。植物单宁是植物的次生代谢产物，属于天然有机 化合物。常是植物及微生物中产生的酚类次生代谢产物。具有抗氧化性、抗 肿瘤、抗动脉硬化、防冠心病与中风等心脑血管病以及抗菌等多种生理功能， 是自然界和人类的“健康卫士”。 2l 世纪随着抗氧化剂理论及研究工作的深 入，以及消费者对食品安全性意识的提高，天然抗氧化剂的应用越来越受到 人们的重视，回归大自然已是目前一个大趋势。木芙蓉（ Hibiscus mutabilis L. ）为锦葵科植物，又名拒霜花、木莲、醉芙蓉，为落叶灌木或 小乔木。其花大色艳，花色一日三变，在寒凉的深秋傲霜怒放，观赏价值极 佳。其花、叶、根富含生化药物成分，是极优良的中药材。中医认为，木芙 蓉性平味辛，有清热、凉血、解毒、消肿、排毒之功效，适用于肺热咳嗽、 月经过多、白带过多、痈疽肿毒、疔疮、水火烫伤等疾病。《本草纲目》言 其“治一切大小痈疽，肿毒恶疮，消肿，排脓，止痛”。木芙蓉花、叶中含 有多酚、黄酮类化合物。 二、实验原理与相关知识 ? 1. 测定总黄酮的原理 : ? 在中性或弱碱性及亚硝酸钠存在条件下 , 黄酮类化合 物先与亚硝酸钠发生氧化还原反应， 再加硝酸铝络 合，最后加氢氧化钠溶液使黄酮类化合物开环，生 成 2- 羟基查耳酮而显红橙色 , 在 510 nm 波长处有吸 收峰且符合定量分析的比尔定律 , 一般与芦丁标准系 列比较定量（它的显色原理发生在黄酮醇类成分邻 位无取代的邻二酚羟基部位 , 不具有邻位无取代邻二 酚羟基的黄酮醇类成分加入上述试剂时是不显色 的）。 二、实验原理与相关知识 ? 2. 多酚测定原理 : ? 总多酚的测定采用 Folin-Ciocalteu 法测定总多酚 含量，其反应原理为酚类化合物在碱性条件下可 以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深 浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长 760 nm 左 右有最大吸收，一般与没食子酸标准系列比较定 量 。 二、实验原理与相关知识 ? 3. 总黄酮对亚硝酸钠清除率的测定 ? 亚硝酸钠在弱酸性条件下，与对氨基苯磺酸重氮 化，然后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色化合物， 用分光光度计测出该化合物的吸光度，就可知道 反应液中亚硝酸钠含量多少。据此可以通过测定 相同条件下亚硝酸钠含量的变化反映总黄酮清除 能力的强弱，亚硝酸钠含量少，总黄酮清除能力 就强，反之则弱。 二、实验原理与相关知识 ? 4. 总黄酮对亚硝胺合成阻断率的测定 ? 二甲胺与亚硝酸钠在模拟人体胃液的条件下 (pH 3.0 ， 温度 37 ℃ ) ，可适宜地生成二甲基亚硝胺。当往样品溶 液中依次加入二甲胺与亚硝酸钠时，样品溶液优先同 亚硝酸钠作用，使得二甲胺不能与亚硝酸钠反应，达 到阻止亚硝胺生成的目的。据此可以通过比较相同