组织-免疫荧光染色protocol.docxVIP

组织免疫荧光步骤: 1） 取出切片，用0.01 M PBS冲洗5minx 3次； 2） 滴加10%正常山羊血清37C封闭45 min; 3） 吸去多余液体，加入抗TSHR的一抗（1:100）,放入湿盒中，37C 孵育1h后置于4 C冰箱中过夜（保持在湿盒中）； 4） 0.01 M PBS冲洗 5minx 3 次； （至下一步开始要适度避光操作，防荧光淬灭！） 5） 在黑暗条件下 加入山羊抗兔IgG-FITC （1: 200） , 37C温育45 min; 6） 在黑暗条件下吸弃二抗（注：不再冲洗），加入DAPI染液 （2.5⑷/ml）,室温作用20 min; 7） 在黑暗条件下0.01M PBS冲洗5min x 6次； 8） 在黑暗条件下防荧光淬灭剂圭寸片，荧光显微镜下观察，用合适波 段激发，照相保存实验结果。 核实好下边的问题你就可以操作了： 1、 准备0.01 M PBS 500 ml，冲洗时动作既要轻柔防脱片，又要保证 冲洗彻底； 2、 抗TSHR的一抗用1: 100,用抗体稀释液稀释； 3、 实验室有没有山羊抗兔IgG-FITC，使用浓度是1: 200； 4、 DAPI染液（2.5卩g/m）实验室有吗？ 5、 防荧光淬灭剂封片实验室有吗？