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慢性房颤患者心肌瞬时外向钾通道 电流密度变化 【摘要】目的旨在研究慢性房颤患者 心房肌瞬时外向钾通道电流的变化， 为房颤 机制的阐明提供更多的实验依据。方法 心 房肌标本取材于体外循环手术患者右心耳。 采用全细胞膜片钳技术研究心房肌瞬时外 向钾通道电流密度的变化。结果 慢性心房 颤动患者心房肌瞬时外向钾通道电流密度 降低，在测试电位-20 mV以上各电位水平时 均有显着性差异(n=16 , P0. 05)。结论慢 性房颤时瞬时外向钾电流密度降低对房颤 的电重构起一定的作用。 【关键词】瞬时外向钾通道；膜片钳； 人体心房肌细胞；心房颤动 心房颤动是一种常见的慢性心律失常， 60岁以上人群中的发病率为 2%~4%随着人 口的老龄化，心房颤动变得更加常见 ［1］。 心房有效不应期的缩短［2-4］和折返环的存 在［5-7］在心房颤动中起重要作用。瞬时外 向钾通道电流(Ito)是复极早期的主要电流， 对于动作电位的形态和调节非常重要， 对动 作电位时程和有效不应期的改变起重要作 用。 本文旨在研究慢性房颤患者心房肌 Ito 的变化，为阐明心房颤动的机制提供更多的 实验依据。 1资料与方法 1. 1实验对象 随机分为两组：慢性心 房颤动组（AF组）和窦性心律组（SR组），AF 组6例，SR组10例，患者均来自三级医院， 通过x 2检验比较性别、年龄、房颤持续时 间、心功能、心脏各腔室直径两组间无显着 差异。 1. 2心肌细胞的分离 心肌标本取材于 体外循环手术时患者的右心耳， 质量50~100 mg标本采用无钙离子、100%R饱和的心肌 麻痹液保存送往实验室。心肌麻痹液含有 （mM）: KH2PO450 MgSO48 Adenosine 5 , HEPES 10 Glucose 140 , Mannitol 100 , Taurine 10（pH 7 . 4）。标本切成小块后用 EGTA夜清洗脱 Ca2+。EGTA夜含有（mM）: NaCl 137,KH2PO45 MgSO41,Glucose 10, HEPES5 , Taurine 10 , EGTA 0. 1（pH 7 . 4）。然后将 标本放入含有150 U/ml胶原酶（V型,Sigma）、 12.6 U/ml 蛋白酶（XXIV 型,Sigma）和 1 mg/ml 白蛋白（Sigma）的EIM液中，维持35C,持 续冲以100赚气，消化一段时间。EIM液含 有（mM）: NaCl 137, KH2PO45,MgSO41,Glucose 10,HEPES 5, Taurine 10（pH 7 . 4）。之后 用不含酶的EIM液洗1 min ,去掉上清液， 再用只含胶原酶的 EIM液消化，直到镜检出 现杆状的细胞为止。细胞用KB液保存备用。 KB液含有（mM）: KCl 20, KH2PO410 Glucose 25, Mannitol 5, Albumin 1, L-Glutamic acid 70, 6 -hydroxybutyrate 10, Taurine 10, EGTA 10,（pH7. 4）。 1. 3 Ito记录 选用静止、杆状、横纹 清楚的细胞，采用全细胞电压钳制技术记录 Ito。玻璃微电极尖端电阻 2?4 MQ。电极内 液含有（mM）: KCl 20 , K-aspartate 110 , MgCl2 1, HEPESI0, EGT代，Phosphocreatine 5（pH7. 2）。细胞浴液含有（mM）: NaCl 136, KCl5. 4, CaCL22, MgCl2 1, NaH2PO40 33, HEPES 5 Glucose 10 , CoCl2 3。电极连接 于膜片钳放大器(Axopatch 200B , Axon Instruments),数据通过数模转换器 (Digidata 1200 , Axon Instruments) 连于 计算机进行记录与分析。采样频率 10 kHz, 低通滤波频率2 kHz。形成封接以前把电极 电位调至零，吸破细胞膜形成全细胞构型后， 补偿串联电阻使其最小化。 记录时浴液的温 度为22 C ~25C，钳制方案见图1。 1.4统计学方法 实验结果中计量资料 均以均数土标准差(x + s)表示，米用t检验， 以P0. 05为差异有统计学意义。数据处理 采用SPSS 11. 0软件。 2结果 记录到的电流为四氨基毗嚏(4-AP)敏 感的电流，2 mM 4-AP可特异性的阻断此电 流。通过比较电流密度来排除细胞体积大小 的影响，电流密度为电流幅度除以细胞膜电 容，单位为pA/pF。细胞膜电容AF组为 (44 . 2土 2. 1)pF , SR组为(50 . 2土 2. 3)pF , 组间比较没有显着性差异。Ito电流密度在 测