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第六章 微生物发酵制药工艺 6.1 微生物发酵与制药 6.2 微生物生长与生产的关系 6.3 微生物生产菌种建立 6.4 发酵培养基制备 6.4 发酵培养基制备 概念（ medium ） 供微生物生长繁殖和合成各种代谢产物所需要的按一定比例配制的多种营养物质的混合物。 ? 培养基的组成和比例是否恰当，直接影响微生 物的生长、生产和工艺选择、产品质量和 产量。 6.4.1 培养基的成分 碳源 氮源 无机盐 水 生长因子 前体与促进剂 消泡剂 1、碳源 (carbon sources) 概念： 构成微生物细胞和代谢产物中碳素的营养物质。 作用： 为正常生理活动和过程提供能量来 源，为细胞物 质和代谢产物的合成提供碳骨架。 碳源种类 糖类：葡萄糖、淀粉、糊精和糖蜜 脂肪：豆油、棉籽油和猪油 醇类：甘油、乙醇、甘露醇、山梨醇、肌醇 蛋白类：蛋白胨、 酵母膏 速效碳源：糖类、有机酸 迟效碳源：酪蛋白水解产生的脂肪酸 2、氮源（ nitrogen sources） 概念： 构成微生物细胞和代谢产物中氮素的营养物质。 作用：为生长和代谢主要提供氮素来源。 种类：无机氮源、有机氮源 有机氮源 几乎所有微生物 都能利用有机氮 源 黄豆饼粉、花生饼粉 棉籽饼粉、玉米浆、蛋 白 胨、酵母粉、尿素 无机氮源 氨水、铵盐和硝酸盐等。氨盐比硝酸盐更快被利用。 工业应用：主要氮源或辅助氮源；调节 pH 值 生理酸性物质：代谢后能产生酸性残留物质。 （NH4 ） 2SO4 利用后，产生硫酸 生理碱性物质：代谢后能产生碱性残留物质。 硝酸钠利用后，产生氢氧化钠。 3、无机盐和微量元素 概念：组成生理活性物质或具有生理调节作用矿物质 ? 作用方式：低浓度起促进作用，高浓度起抑制作用。 ? 种类：盐离子 磷、硫、钾、钠、镁、钙，常常添加 铁、锌、铜、钼、钴、锰、氯，一般不加。 4、水 菌体细胞的主要成分。 营养传递的介质。 良好导体，调节细胞生长环境温度。 培养基的主要成分之一。 5、生长因子（ growth factor ） 概念： 维持微生物生长所必需的微量有机物，不起碳源和 氮源作用。 种类： 维生素、氨基酸、嘌呤或嘧啶及其衍生物、脂肪酸 等。 天然成分中含有：一般无需添加。 营养缺陷型菌株：必需添加。 6、前体 (precursor) 概念： 加入到发酵培养基中的某些化合物，被直接结合到 目标产物分子中，而自身的结构无多大 的变化。 ? 使用： 添加前体是提高抗生素产量的重要措施。 多次少量流加的工艺。 6、促进剂 (accelerant) ?概念： 促进产物生成的物质，但不是营养物，也不是前体 的一类化合物。 ?种类： 氯化物有利于灰黄霉素、金霉素合成。 表面活性剂吐温、清洗剂，脂溶性小分子化合物等， 起诱导作用。 7、消沫剂（ defoamingagent） ?概念： 降低泡沫的液膜强度和表面黏度，使泡沫破裂的化 合物。 ?种类：表面活性剂， 低表面张力。 天然动植物油脂类、 高分子化合物 （高碳醇脂肪酸 和酯类、聚醚类、硅酮类）。 ?作用： 消除泡沫，防止逃液和染菌。 6.4.2 培养基种类及其质量控制技术 培养基的种类 按用途：选择性、鉴别性、富营养培养基等 按物理性质：固体，半固体、液体培养基按化学组成：合成、半合成、天然培养基 按发酵过程中所处位置和作用：斜面或平板固体、 种子、发酵和补料培养基。 1、固体培养基 ? 概念：（ solid medium ） 细菌和酵母的固体斜面或平板培养基，链霉菌和丝 状真菌的孢子培养基。 制备： 液体培养基添加 1.0-2.0%琼脂粉。 作用： 提供菌体的生长繁殖，形成孢子。 1、固体培养基－要求与质量 控制 ?单细胞培养基： 营养丰富，满足菌体生长迅速，不 能引起变异。 ?孢子培养基：基质浓度较低，无 机盐浓度适量，以利于孢子形成。 营养不宜太丰富，否则不易产生孢 子。 2、种子培养基 ?概念：（seed medium） 供孢子发芽和菌体 生长繁殖，摇瓶和 作用： 种子罐培养基 ,为液 体。 使种子扩大培养， 增加细胞数目， 生长形成强壮、 健康和高活性的 种子。 2、种子培养基－ 要求与质量控制 用速效性、容易被利用的碳、 培养 基成 分必 需完全， 营养 丰富。 氮源和无机盐等物质，但浓度不宜高。 种子培养基要与发酵培养基相  适应，主要成分接近，不能差  异太大。 缩短 发酵 的延 滞期。 3、发酵培养基 ?概念： (fermentatio n medium) 提供微生物 生长、目标 产物生成的 生产用培养 基。 作用： 不仅要满足 菌体的生长 和繁殖，还 要满足菌体 合成目标产 物，是发酵 生产中最关 键和最重要 的培养基。 要求 ?营养物质浓度和 粘度适中 ?组成上丰富完整 ?不同菌种和