免疫共沉淀原理及步骤-免疫共沉淀步骤[参照].pdfVIP

免疫共沉淀原理及步骤 免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)原理 IP 是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的 “protein A/G特异性地结合到抗 体 (免疫球蛋白)的FC 片段的现象开发出来的方法。目前多用 protein A/G 预先结合在 argarose beads 上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads 上的 prorein A/G 就能达到吸附抗原的 目的。通过低速离心，可以从含有目的抗原的溶液中将目的抗原与其它抗原分离。 免疫沉淀实验的操作步骤比较多，同时由于在非变性条件下进行实验，所以要得到一个完美的实 验结果，不仅需要高质量的抗体，同时对免疫沉淀体系也需要有严格的控制指标。免疫沉淀实验 从：蛋白样品处理；抗体-agarose beads 孵育；抗体-agarose beads 复合物洗涤到最后的鉴定， 每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个关键步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。 IP 实验步骤 基本实验步骤 (1)收获细胞，加入适量细胞 IP裂解缓冲液 (含蛋白酶抑制剂)，冰上或者4℃裂解30min，12,000g 离心 30 min 后取上清； (2) 取少量裂解液以备 Western blot 分析，剩余裂解液将 1μg相应的