汇总简述转基因技术原理.doc

精选 转基因技术的理论基础来源于 进化论衍生来的分子 生物学。 基因片段的来源可以是提取特定 生物体 基因组中所需要的 目的基因，也可以是 人工 合成指定序列的 DNA片段。DNA 片段被转入特定生物中，与其本身的基因组进行 重组，再从重组体中进行数代的人工选育，从而获得具有稳定表现特定的遗传 性状的个体。该技术可以使重组生物增加人们所期望的新性状，培育出新品种。 1992年 荷兰培育出植入了人促红细胞生成素基因的转基因牛，人促红细胞生成素能刺激红细胞生成，是治疗 贫血的良药。转基因技术标志着不同种类生物的基因都能通过基因工程技术进行重组，人类可以根据自己的意愿定向地改造生物的遗传特性，创造新的生命类型。同时转基因技术在药物生产中有着重要的利用价值。转基因技术，包括 外源基因的 克隆、 表达载体、 受体细胞，以及转基因途径等，外源基因的人工合成技术、 基因 调控网络的人工设计发展，导致了21世纪的转基因技术将走向转基因系统生物技术 2000年国际上重新提出 合成生物学概念，并定义为基于 系统生物学原理的 基因工程与转基因技术。 1.转基因的细胞学原理： (1)细胞周期及MPF：细胞周期可人工分成4个时期，分别为G1期、S期、G2期和M期。细胞在正常情况下，沿着G1-S-G2-M路线运转。S期为DNA合成期，M期为有丝分裂期，M期结束到S期开始之前为G1期，S期末到有丝分裂期(M期)为G2期。有丝分裂的启动由成熟促进因子也叫M期促进因子(maturation/mitosism/meiosis promoting factor，MPF)调控，MPF在细胞分裂中呈周期性变化即分裂后逐渐积累，到G2晚期达到高峰，由中期向后期转换时骤然消失。因此推测MPF是真核细胞M期的一个基本调节物质，能引导细胞由间期向M期转变。MPF由蛋白激酶激活，存在于所有的真核细胞中(包括减数分裂的性细胞)。但并非所有的细胞都是周期中细胞，某些细胞在一定的条件下可以脱离细胞周期进入G0期或分化为不分裂的细胞，而且G0期细胞可通过诱导重新进入周期。 (2)通过MⅡ期的卵母细胞转基因：MⅡ期的卵母细胞的MPF含量很高，可以诱导细胞核发生一系列变化包括核膜破裂(NEBD)和早熟染色体凝集(premature chromosome condensation，PCC)，处于减数分裂MⅡ期的卵母细胞无核膜的时间远远长于有丝分裂M期的细胞。所以此时期的卵母细胞可作为基因导入的受体。据此1998年Anthonv等对逆转录病毒载体感染发育早期的动物胚胎方法加以改进，用逆转录病毒载体注射MⅡ期的卵母细胞，注射完毕的卵母细胞同获能后的精子共同孵育后，体外发育至囊胚，再移植到母牛体内得到了转基因小牛。1999年Anthonv等又将精子与外源基因共孵育，然后将精子头部显微注射入MⅡ期的卵母细胞，这两种方法共同之处都是利用MⅡ期的卵母细胞无核膜，外源基因易导入的特点。 2.转基因的胚胎学原理： (1)哺乳动物转基因的胚胎学原理：精子和卵子只有发育成熟后，精卵相遇时才能完成受精过程。精子进入卵子后头尾分离，胞核出现核仁，形成核膜，头部膨大形成雄原核；同时卵子排出第二极体形成雌原核。一般来说雄原核比雌原核大。接着雌雄原核的核膜消失，雌雄原核融合。随后细胞周期性卵裂，分裂球增加到32个时形成桑葚胚，进入子宫再发育至囊胚，此前的胚胎细胞具有很强的分化能力。从哺乳动物受精卵分裂发育的规律来看，转基因操作时较合适的部位是受精卵的雄原核，精子进入卵细胞后的1小时，雄原核和雌原核还未融合，在显微镜下容易看到雄原核。多数研究者在此时期把外源基因显微注射到雄原核，通过雌雄原核的融合把外源基因整合入受精卵。有的研究者认为，注射时间应选在精卵融合后的受精卵有丝分裂S期进行，外源基因可以借助受精卵自身基因组DNA复制时形成的缺口或缝隙及重组过程，整合到受精卵的基因组中。 (2)禽类转基因的胚胎学原理：家禽与哺乳动物相比其生殖生理特点有所不同，家禽卵子在输卵管中遇到精子完成受精，可能有多个精子进入卵细胞，精子进入时，卵子处于第二次分裂中期。精子入卵后，卵子排出第二极体，此时二者分别形成雄原核、雌原核，然后雌雄原核融合，雄原核很快被包上一层脂粒。融合后的受精卵在输卵管前移的过程中一边分裂，一边形成卵清、蛋壳等，鸡蛋产出体外时，已发育到6 000个细胞的囊胚期。由于单细胞期的卵子不易获得，因此不宜对卵子进行基因操作。鸡卵子受精时有多个精子进入卵细胞，无法辨清哪一个精子与雌原核融合，且雄原核很快包上一层脂粒，所以也无法像哺乳动物那样对雄原核注射。所以鸡的转基因操作，一般选择在刚产出蛋(即未孵蛋)的胚盘进行注射，注射位置是受