酶联免疫吸附试验操作的注注意事项.ppt

酶联免疫吸附试验手工操作注 意事项  酶免疫测定类型 酶免疫组化 酶免疫技术 均相酶免疫测定 酶免疫测定 相藤免测定 非均相酶免疫测定 液相酶免疫测定 这种固相酶免疫测定方法在1971年最初建立时称为 酶联免疫吸附剂测定( Enzyme linked ImmunoSor bent Ass 简称 ELISA。  ELSA原理(以一步法双抗体夹心法测抗原为例) EL|SA其原理为抗原抗体特异性结合和抗原抗体的酶标记,蚁酶 催化底物显色来判断结果。  ◆影响酶联免疫测定的因素较多,诸如标本的采集 保存、试剂的准备、加样的技术、孵育温度的控 制、洗涤反应板的方式、显色反应时间的控制等 系列问题均有可能对试验结果产生很大的影响 只有避免了这些因素,才能保证试验结果的准确 性和可靠性  移液枪的使用 Research手动多道移液器 Research手动单道移液器 Research" pro电动单道移液器 Reference,手动单道移液器 Research°pro电动多道移液器  1.样品准备 (1)吸样之前要保证移液枪、枪头和液体处于相 同温度。置于冰箱保存的样品应提前取出,室温 放置,使温度平衡后再吸样。 ◇液体温度>吸头温度的移取的液体体积会偏大 ◆液体温度<吸头温度的移取的液体体积会偏小 (2)若溶剂瓶中液体太少,可倒入EP管中,方便 吸取。  2.体积设定 大体积→小体积逆时针精度最佳 小体积→大体积顺时针调至超过设定刻度,再回调 可保证最佳的精确度 从大到小的调节从小到大的调节 o+ 图1 严格的精确调节方法  3.装枪头 ◆将移液枪端垂直插入吸头,左右微微转动,上紧即可 上下敲击会引起内部 的零部件因瞬间强烈 撞击而松散 甚至会导致调节刻度 的旋钮卡住  4.吸液 ◆(1)垂直吸液,枪头吸嘴尖端需浸入液 面2-4mm以下。 ◆(2)枪头吸嘴预润湿(2-3次),使吸 嘴内壁液体吸附达到饱和,再吸入样液, 最后打出液体的体积会很精确 当) 及液( 正向吸液  ◇(3)缓慢吸取,控制好弹簧的伸缩速 度。吸液速度太快会产生反冲和气泡, 导致移液体积不准确和腐蚀枪体 (4)吸取后将移液枪提离液面,停约 秒钟,观察是否有液滴缓慢地流岀。 若有流出,说明有漏气现象(原因有 枪头未上紧;枪头不匹配;移液枪内部 气密性不好)。 ◆(5)吸嘴外壁残留液滴可沿壁靠去或 用滤纸蘸擦。