免疫学实验流式CBA多因子检测详解.docx

【免疫学实验】流式 CBA 多因子检测详解 CBA 原理详细介绍 Cytometric Bead Array （ CBA ），即 细胞因子微球检测技术。是一种基于流式细胞检测系统的多重蛋白定量检测方法，它能够同时对单个样品中的多个指标进行检测。 BD 公司利用流式细胞仪可对荧光信号进行级数放大的特性，将受检的可溶性因子附着于一些具有近似细胞直径的微粒上，即可对受检样品中的各种可溶性因子进行检 测。 CBA 的基本原理近似于 ELISA 的检测，即利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物， 并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光， 从而测定待测 物的数量。详细原理介绍每个 CBA 微球大小一致，具有特 定的荧光强度，包被有适用于特定分析（如其它抗体或者可 溶性蛋白）的特异性捕获抗体（ Capture Antibody ），提供了 类似 ELISA 孔板的捕获表面。 当微球和待测样品溶液混合后， 微球上的特异性抗体就与样品 （血清、血浆或者细胞培养液） 中相应的抗原或蛋白结合，然后加入荧光标记的检测抗体，就会形成“三明治”夹心复合物。最后通过流式细胞仪对特异性目的蛋白进行检测。 CBA 的每种微球携带有不同强度的红色荧光，在流式细胞仪的 FL3 通道通过检测微球荧光强度的 差异对目的蛋白定性；检测抗体带有 PE 荧光素标记，在流式细胞仪的 FL2 通道检测，通过检测抗体的 PE 荧光强度定 量目的蛋白。 CBA 技术特点 CBA 具有 FCM 的宽范围荧光 检测特点，对样本需求量更少，检测更快速、更准确。下面 我们介绍一下 CBA 主要的技术特点 : 1、轻松实现多重检测。最多可同时对一个样本中的 75 个目 的蛋白进行精确定量。 2、样本需要量小。仅需要 50μL溶液就可进行一次检测。 3、更高的灵敏度。分析灵敏度高达 2.8pg/mL 。 4、更高的灵敏度、更宽的检测范围和更好的重复性。 CBA 技术使蛋白定量的分析灵敏度高达 pg/ml 级别 ,检测范围达 0-5000pg/ml ，所有分析只需一组标准曲线。根据抗体的荧 光强度对目的蛋白定量， 排除了 ELISA 反应中酶联放大产生 的假阳性。 5、检测对象的灵活组合— BD CBA Flex Set 。 CBA kit 是同 时检测试剂盒配好的 6 个指标，形式比较固定。为满足不同 客户的实际需要和研究兴趣，  BD  于  2005  年初推出了  CBA Flex set  。它改变了  CBAkit  的固定形式，成为自由组合、灵 活搭配的“自助餐”。您可以根据需要组合不同的捕获微球来 检测多个指标， 最多能同时检测 75 个指标。除了拥有 CBA kit 的优势外，  Flex Set  还配有独立的软件分析系统（  CBA Flex Set Analysis Software  ），并且可以在  BD FACSArray Bioanalyzer 上，直接用 96 孔和 384 孔板进行操作。 CBA Flex set 赋予研究者更灵活、更自由，更大的选择空间，而且进 一步丰富了 CBA 产品线。种类涉及免疫、细胞信号传导、 细胞凋亡等许多领域的蛋白定量分析。 6、操作简单，省时省力。 CBA 技术采用芯片式集成测定， 所有检测只需一组标准曲线，就可计算出每种待测蛋白浓度； 操作简单，整个流程只需要 3.5 小时，对待测样本可做实时 分析，缩短检测了时间，提高了检测效率。 7、强大的软件分析系统。 BD CBA 软件具有强大的数据处 理能力，直接将目标蛋白的检测结果换算成标准浓度；除了 为用户提供待测物的计数结果外，还能提供可视轮廓或信号 图形以帮助用户获得更多的信息。有用于 Macintosh 和 Microsoft 系统两种版本供您选择。 和传统的液相蛋白定量技 术相比， CBA 技术是一种“多元”和“同步”的检测技术。革新 的 CBA 技术与传统的蛋白定量相比有下列优点： CBA 检测对象血清、 血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、 细胞培养液上清、细胞裂解物等。 CBA 应用领域 ?炎症因子的水平的分析 ?肿瘤研究及肿瘤疾 病的辅助诊断、 疗效和预后监测 ?凋亡相关蛋白分析 ?系统性 红斑狼疮（SLE ）和新生儿脓血症等免疫疾病的监控 ?干细胞 研究和干细胞治疗监测 ?免疫学研究和免疫疾病的辅助诊断 和监控 ? 感染疾病的研究及辅助诊断和疗效评价 ?免疫功能 监测 ?药效评价，药物研发、疫苗研究 ?细胞信号传导中磷酸 化蛋白、凋亡相关蛋白定量分析 CBA 指标检测明细 :1、 CBA 指标 3、 CBA Flex Set  信号转导指标 4、 CBA Flex Set  干细胞