ABI3730XL测序实验流程-2007-3-15.docVIP

ABI3730XL测序实验程序 质粒DNA的提取/电泳/测序PCR反应与纯化/上机测序及机器维护 ………………………………………………………………………………………… 质粒DNA的提取 菌的培养 将TB培养基加96深孔板中，每孔1.2ml（抗生素依载体而定）。 提前将超净工作台进行紫外消毒，挑菌之前用医用酒精彻底把超净工作台擦一遍，然后开风机和白灯，点燃酒精灯。 用已灭菌的牙签将大小差不多的单克隆从Q-tray上挑至96深孔板中, 以保证培养的菌生长均匀。挑菌时最好按照深孔板上的序号有顺序的放入以免漏挑，挑完一板后，放一会儿，将牙签按照挑菌的先后顺序拔出，盖好胶盖。 整个挑菌过程结束后，写好板号，放入摇床培养，230rpm，37℃，一般培养时间以19-21hrs为宜。 菌的保存：96孔板回接384的保菌过程 需准备的物品： 医用酒精，两个洗复制头的盒子，酒精灯，打火机，384板（含70-75?l保菌用的培养基）和一个记时器。 将摇好的菌以及上述的物品全部放入提前消毒过的超净工作台内。 首先将两个洗刷盒倒入一定量的医用酒精，然后在另一旁点燃酒精灯（注意一定要远离两个酒精盒子） 将写好的标签纸贴在384板上，保证384和96孔板号一致，准备工作做好后开始复制。 将96针复制头放到酒精盒子里，浸泡三分钟（起消毒、杀菌作用），待96针复制头上的酒精凉干后，再用酒精灯的外焰过一下（起双重