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高效液相色谱柱基础知识 张润平  色谱柱的构造 √色谱柱由柱管、填料压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片) 接头、螺丝等组成。 √柱管多用不锈钢制成,压力不高于70kg/cm2时,也可采用 厚壁玻璃或石英管。为提高柱效,减小管壁效应,管内壁要求 有很高的光洁度,不锈钢柱内壁多经过抛光。 ′色谱柱两端的柱接头内装有筛板,是烧结不锈钢或钛合金,孔 径0.2~20μm(5~1oμm),取决于填料粒度,目的是防止填料 漏出。  色谱柱的种类 按用途分类 分析型 口常规分析柱,内径2~5mm(常用4.6mm,国内有4mm和 5mm),柱长10~30cm,粒径3.5或5m,; 口窄径柱(又称半微柱semi- microcolumn),内径1~2mm, 柱长10~20cm; 口毛细管柱(又称微柱 microcolumn),内径0.2~0.5mm; 制备型 口半制备柱,内径>5mm; 口实验室制备柱,内径20~40mm,柱长10~30cm; 口生产制备柱,内径可达几十厘米。  色谱柱的种类 按分离机制分类三 吸附型色谱柱 化学键合相色谱柱(分配型) 令正相键合相色谱柱 ◇反相键合相色谱柱 离子交换色谱柱 凝胶色谱柱 亲合色谱柱 手性色谱柱  色谱柱的种类 按填料基质分类三 硅胶 口是HPLC填料中最普遍的基质 口具有高强度,不会在溶剂中收缩或膨胀 口能提供一个含有游离硅羟基的表面,可以通过硅 烷化技术键合上各种配基,制成正相、反相、离 子交换、分子排阻色谱用填料 口适用于广泛的极性和非极性溶剂。 口缺点是在碱性水溶性流动相中不稳定,易溶解  色谱柱的种类 〉高分子聚合物 常用的是以高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或聚甲基丙 烯酸酯为基质的球形填料。 ·压力限度比无机填料低 在整个pH范围内稳定,可以用NaOH或强碱来清洗 色谱柱; ·聚合物基质在流动相发生变化时会出现膨胀或收缩, 对于小分子化合物柱效低; 主要用于大分子化合物,常制成凝胶柱或离子交换 柱  化学键合相色谱柱 定义:将有机官能团通过化学反应共价键合到硅 表面的游离羟基上而形成的園定相称为化学键合相。 种类 口非极性键合相(反相):键合相表面基团为非极性 羟基,如C18、C8、C3、乙基、甲基与苯基 口中等极性键合相:常见的为醚基和二羟基键合相, 既可做正相又可做反相色谱的固定相,视流动相极三 性而定。 口极性键合相(正相):常用的为氨基、氰基、二醇 基键合相  化学键合相色谱柱的合成 键合相(配体 C18 端基封口基团 ■合成步骤: 残留硅羟基 1.合成硅胶基质 2.键合配体(键合相) 3.端基封囗 硅胶基质  化学键合相色谱柱的合成 〉化学键合相般采用微粒多孔硅胶为基体,用烷 烃二甲基氯硅烷或烷烃氯硅烷与硅胶表面的游离 硅羟基反应,形成Si-OSⅰ-C键形的单分子膜而 制得。 由于空间位阻效应和其它因素的影响,使得大约 有40~50%的硅醇基未反应。残留硅羟基可以 减小非极性键合相表面的疏水性,对极性溶质 (特别是碱性化合物)产生次级化学吸附,从而 使保留机制复杂化,使碱性组分的峰形拖尾  化学键合相色谱柱的合成 端基封口:为尽量减少残余硅醇基,一般在键合 反应后,要用三甲基氯硅烷(TMCS)等进行钝化 处理,称端基封口,以提高键合相的稳定性,改 善脱尾。 键合相的键合量常用含碳量(C%)或覆盖度来表 示。覆盖度:指参与反应的硅羟基数目占硅胶表 面硅羟基总数的比例。 除硅一碳杂化硅胶外,一般硅胶基质的pH适用 范围为pH2~8,低pH引起键合相水解脱落,高 pH引起硅胶溶解