植物查尔酮合酶CHS酶联免疫分析使用说明书.docVIP

植物查尔酮合酶 (CHS) 酶联免疫分析使用说明书 使用目的： 本试剂盒用于测定植物组织，细胞及其它相关样本中查尔酮合酶 (CHS) 活性 。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物查尔酮合酶 (CHS) 水平。用纯化的植物查 尔酮合酶 (CHS) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 植物查尔 酮合酶 (CHS) ，再与 HRP 标记的查尔酮合酶 (CHS) 抗体结合， 形成抗体 -抗原 -酶标抗体复 合 物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的 作 用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物查尔酮合酶 (CHS) 呈正相关。用酶 标 仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中植物查尔酮合酶 (CHS) 活性浓度。 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上 进行试验，可将标本放于 -20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 操作步骤 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 80 U/L 号标准品 150μ l 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液 40 U/L 号标准品 150μ l 的 5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 20 U/L 号标准品 150μ l 的 4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 10 U/L 号标准品 150μ l 的 3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液 5 U/L 1 号标准品 150μ l 的  2 号标准品加入  150μl  标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、标准孔、 待测样品孔。 在酶标包被板上标准品准确加样 50μ l，待测样品孔中先加样品稀释液 40μ l， 然后再加待测样品 10μ（l 样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部， 尽 量 不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜， 弃去液体， 甩干，每孔加满洗涤液， 静置 30 秒后弃去， 如此 重复 5 次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μ l，空白孔除外。 7.温育：操作同 3。 8.洗涤：操作同 5。 9.显色：每孔先加入显色剂 A50μ l，再加入显色剂 B50μ l，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色 分钟 . 终止：每孔加终止液 50μ l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值）。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。 操作程序总结： 计算以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线， 根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度； 再乘以稀释倍数； 或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准 曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。 注意事项 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用， 酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器， 并经常校对其准确性， 以避免试验误差。 一次加样时间最好 控 制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线， 最好做复孔。 如标本中待测物质含量过高 （样本 OD 值 大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数 （ n 倍）后再测定， 计 算 时请最后乘以总稀释倍数（× n× 5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 . 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存： ； 2-8℃。 2．有效期： 6 个月