肿瘤侵袭、转移实验技术.pptVIP

三、Transwell ①Transwell小室：常用8.0um膜，铺胶130rmb、不铺胶40rmb，可重复利用 ②上层培养液：无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%-0.2% BSA ③ 细胞：有侵袭能力细胞 先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验 材料准备及说明： 三、Transwell ④ 基质胶：常用的是人工重构基底膜材料Matrigel ⑤ 下层培养液：含5%－10% FBS的培养基， 也可用趋化因子 ⑥ 细胞培养板：6孔板、12孔板、24孔板等， 以24孔最常用 材料准备及说明： 三、Transwell 1.Transwell小室制备 ①包被基底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干 ② 水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37℃，30min。 三、Transwell 2.取细胞悬液加入Transwell小室，24孔板小室一般200μl。细胞密度为1－10×105个. 3.24孔板下室一般加入500μl含FBS或趋化因子的培养基。 三、细胞划痕实验 4.培养细胞：常规培养48h，具体调整 5.结果测定： ①直接测定：细胞染色，镜下计数 ②间接测定：MTT法、荧光试剂检测、结晶紫染色 问：某药可抑细胞侵袭，24h