3 生物分子相互作用研究的重要工具 SPRSensor.ppt

Biacore SPR sensor chips ? Chip name Dextran Modification Application ? CM5 100 nm 100% carboxylation general ? CM4 / B1 100 nm 30% carboxylation cell extracts / serum and membranes ? CM3 / F1 30 nm 100% carboxylation cell extracts / serum and membranes ? C1 none 100% carboxylation phage binding ? NTA 100 nm NTA capturing poly HIS-groups ? HPA none hydrophobic lipid capturing ? L1 100 nm lipophilic substancesbilayers to mimic membranes ? SA 100 nm streptavidin capturing of biotin ? AU / J1 none none user defined surface chemistry ? SIA none none surface interaction analysis in material science 配体（生物分子）与表面基质的偶联方法 配体与传感芯片的偶联方法 （ 1 ）氨基偶联法 （ 2 ）配体巯基偶连 （ 3 ）醛基偶连法 几种芯片 CM5 传感芯片 CM4 传感芯片 CM3 传感芯片 SA 传感芯片 NTA 传感芯片 L1 传感芯片 生物学应用 分子生物学领域 免疫学领域 微生物领域 药物领域 食品工业领域 临床医学领域分子生物学领域微生物领域免 疫学领域 分子生物学领域 ? DNA 复制 ? 转录调控 ? 蛋白质间相互作用 ? 核酸之间、核酸与蛋白质间的相互作用 ? 酶促反应检测 ? 生物小分子检测 SPR 技术在蛋白质组学中的作用 生物分子相互作用分析质谱质谱 ( ＢＩＡ - Ｍ Ｓ ) 是ＳＰＲ - ＢＩＡ技术与传统的蛋白鉴定 技术ＭＡＬＤＩ - ＴＯＦ - ＭＳ ( 基质辅助的 激光解吸离子化时间飞行质谱 ) 有机结合形 成的一种新的研究手段 ＢＩＡ - ＭＳ分为两步 : 第一步 , ＳＰＲ检测自身环境中的生物分子 ; 第二步 , ＭＡＬＤＩ - ＴＯＦ - ＭＳ鉴定结合 在ＳＰＲ传感器表面的分析物。这种方法 综合了ＳＰＲ - ＢＩＡ和ＭＡＬＤＩ - ＴＯＦ - ＭＳ两种技术的优势 , 实现了定量与定性的 结合 ＢＩＡ - ＭＳ在研究蛋白质复合物组分 间相互作用的动力学参数、利用结合位点 结构的研究筛选功能性的突变、通过依次 结合事件的分析揭示重要的生理分子级联 反应机制、研究任何蛋白质间的相互作用 等方面具有广泛的用途 , 是蛋白质组学中研 究的有力工具 蛋白间相互作用方面的研究 利用ＢＩＡ - ＭＳ可以筛选和鉴定感兴趣 的蛋白及与 结合的对象 , 这是ＢＩＡ - ＭＳ 的一个主要应用领域。例如采用ＢＩＡ与 基因标签技术进行蛋白质的鉴定。实验将 表达标签基因融合入未知基因中 , 通过标签 基因的表达来检测痕量表达的靶蛋白。靶 蛋白的分子量由ＭＡＬＤＩ - ＴＯＦ在传感 器芯片表面直接测定 , 并经序列资料库的搜 寻核实、鉴定 蛋白结构与功能关系的分析 ＢＩＡ在实时检测分子间相互作用时 可提供动力学信息。同一蛋白质中不同氨 基酸残基与其他分子相互作用时的动力学 改变不同 , 因此可推测出该蛋白内部存在的 不同功能基团、蛋白在翻译后发生的不同 修饰。 将脂蛋白 B100 固定于传感器芯片上， 依次注入不同的单克隆抗体，由于不同的 抗体与脂蛋白 B100 相互作用的能力不同， 所以可以精确鉴定脂蛋白 B100 上的不同结 构域。其余的用途可以筛选蛋白的遗传多 态性，检测人类遗传突变，并且可以区别 正常和突变的靶 DNA 生物分子作为分析物可与传感芯片上固 相化的特定的配位体进行生物特异性相互作 用，例如传感芯片 SA 结合生物素化的配位 体可与肽类、蛋白质类及 DNA 等分析物结 合。传感芯片 NTA 通过金属络合捕获配位 体可与组氨酸标记蛋白质类分析物结合。传 感芯片 HPA 的疏水性表面涂以规定使用的 脂质体类，造成亲水性表面与分析物结合 Karlsson 等应用自动的