2017人教版高中生物选修三12基因工程的基本操作程序配套课件.ppt

1 . 2 基因工程的基本操作程序 课 前 预习导学 目标 导航 学习目标 1 . 简述基因工程原理及基本操作程 序。 2 . 记住目的基因导入受体细胞的方法。 3 . 理解目的基因检测与鉴定的方法。 重点难点 重点 : 基因工程基本操作程序的四个步 骤。 难点 : 1 . 从基因文库中获取目的基因。 2 . 利用 PCR 技术扩增目的基因。 预习 导引 基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤 : 目的基因的获取 、 基因表 达载体的构建 、 将目的基因导入受体细胞 、 目的基因的检测与鉴定 。 一、目的基因的获取 1 . 目的基因主要是指编码 蛋白质 的基因。 2 . 获取目的基因的常用方法有以下几种 : (1) 从 基因文库 中获取目的基因。 将含有某种生物不同 基因 的许多 DNA 片段导入 受体菌 的群体中 储存 , 各个 受体菌 分别含有这种生物不同的基因 , 称为基因文库。 基因文库包括两种 : 基因组 文库 , 即包含一种生物所有基因的文库 ; 部分基因 文库 , 即只包含一种生物一部分基因的文库 , 如 cDNA 文库。 (2) 利用 PCR 技术 扩增目的基因。 ① PCR 的含义 : 是一项在生物 体外 复制特定 DNA 片段的核酸合成 技术。 ②目的 : 获取大量的目的基因。 ③原理 : DNA 双链复制 。 ④过程 : 第一步 , 加热至 90~95 ℃ , DNA 双链完全分开 ; 第二步 , 冷却到 55~60 ℃ , 引物结合到互补 DNA 链 ; 第三步 , 加热至 70~75 ℃ , Taq 酶从引物起始进行互补链的合成 。 如此重复循环多次。 ⑤特点 : 指数形式扩增。 (3) 用化学方法人工合成。 如果基因比较 小 , 核苷酸序列又已知 , 也可以通过 DNA 合成仪用化 学方法直接人工合成。 预习 交流 为什么要构建基因文库 ? 直接从含目的基因的生物体内提取不行 吗 ? 提示 : 构建基因文库是获取目的基因的方法之一 , 并不是唯一的方 式。 如果所需要的目的基因序列已知 , 就可以通过 PCR 方式以含有该基 因的生物的 DNA 双链为模板直接获得 , 也可以通过反转录 , 用 PCR 方式 以 mRNA 为模板反转录出来的 DNA 为模板获得 , 不一定要构建基因文 库。但如果所需要的目的基因的序列完全不知 , 或只知道目的基因序列 的一段 , 或想从一种生物体内获得许多基因 , 或者想知道这种生物与另 一种生物之间有多少基因不同 , 或者想知道一种生物在个体发育的不 同阶段表达的基因有什么不同 , 或者想得到一种生物的全基因组序列 , 往往就需要构建基因文库。 二、基因表达载体的构建 1 . 构建目的 : 使目的基因在受体细胞中 稳定存在 , 并且可以 遗传 给 下一代 , 同时 , 使目的基因能够 表达 和 发挥作用 。 2 . 基因表达载体的组成 : 目的基因 、 启动子 、 终止子 、 标记基因 等。 3 . 由于 受体细胞 不同 , 以及目的基因导入受体细胞的 方法 不同 , 基 因表达载体的构建也有所差别。 三、将目的基因导入受体细胞 1 . 转化的概念 : 目的基因 进入受体细胞内 , 并且在受体细胞内维持 稳定和表达 的过程。 2 . 常用的转化方法 : (1) 将目的基因导入植物细胞 : 采用最多的方法是 农杆菌转化 法 , 除 此之外 , 还有 基因枪 法和 花粉管通道 法等。 (2) 将目的基因导入动物细胞 : 最常用的方法是 显微注射 技术。 此方 法的受体细胞多是 受精卵 。 (3) 将目的基因导入微生物细胞 : 早期的基因工程都用原核生物作 为受体细胞 , 其中以 大肠杆菌 应用最为广泛。大肠杆菌细胞最常用的转 化方法是 : 先用 Ca 处理细胞 , 使其成为感受态细胞 , 再将重组表达载体 DNA 分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合 , 在一定的温度下促进感受 态细胞吸收 DNA 分子 , 完成转化过程。 2+ 预习 交流 从细胞器的功能上分析 , 若通过基因工程生产人的糖蛋白 , 可以用大肠 杆菌作受体细胞吗 ? 提示 : 不可以。糖蛋白上的糖链是在内质网和高尔基体上加工完成的 , 而内质网和高尔基体存在于真核细胞中 , 大肠杆菌是原核生物 , 细胞中不含 有这两种细胞器。 四、目的基因的检测与鉴定 1 . 首先要检测转基因生物的染色体 DNA 上是否插入了 目的基因 , 方法 是采用 DNA 分子杂交 技术。 2 . 其次还要检测目的基