生物制药与药品检验技术 寻找病毒“克星”系列之3—核苷、核苷酸及碱基的制备 课件：核酸类药物原料制备方法3-核苷、核苷酸及碱基的制备.pptx

;项目三 核酸类药物的原料制备与分析检验;寻找病毒“克星”核酸类药物的原料制备方法 --核苷酸、核苷及碱基的制备;学习内容： （1）直接提取法 （2）水解法 （3）酶解法、发酵法、化学合成法 学习重点： 不同提取制备方法的特点;关键：去杂质 多次溶解、沉淀 如：从兔肌肉中提取ATP和从酵母或白地霉中提取辅酶A （ADP的衍生物或类似物，用于白细胞减少、血小板减少）;核酸水解为寡核苷酸、核苷酸、核苷及碱基等 酸水解、碱水解、酶水解 化学降解，外源性酶解，内源性酶解（自溶??? ;1、酶水解法：在酶催化下的水解方法 如：制备5’-（脱氧）核苷酸 指明所用酶的来源，如牛胰核糖核酸酶（RnaseA）、蛇毒磷酸二酯酶（VPDase）、脾磷酸二酯酶（SPDase）等。 ;2、碱水解法：在稀碱条件下可将RNA水解成单核苷酸，产物为2’-核苷酸和3’-核苷酸的混合物 如：1mol/L的碱，室温条件下，使RNA水解成核苷酸，相同条件下DNA水解就较少 DNA较RNA易为酸（如甲酸，过氧酸等）所水解 ;3、酸水解法 1mol/L的盐酸溶液，100℃，加热1h，RNA水解成嘌呤碱和嘧啶碱核苷酸的混合物；DNA的嘌呤碱也被水解下来 高压釜或封闭管中，酸水解，使嘧啶碱从核苷酸上释放下来，但胞嘧啶常会脱氨基而形成尿嘧啶;核糖核苷的制备：更剧烈的水解条件 浓氨水溶液 50%甲酰胺水溶液;核苷酸、核苷及碱基的进一步分离纯化 同DNA与RNA;1. 生物体自身能够合成的核酸类药物：基本上都可以经由微生物发酵或从生物资源中提取 ;发酵法：利用微生物的特殊代谢使某种代谢物积累，从而获得该产物。 如：微生物在正常代谢下肌苷酸IMP是中间产物，不积累，当其突变为腺嘌呤营养缺陷型后，肌苷酸就不能转化成AMP，大量的肌苷酸就成为终产物而积累在发酵液中。可发酵制备肌苷酸。;2. 自然结构碱基、核苷、核苷酸的结构类似物或聚合物的核酸类药物（如三氟代胸苷、阿糖胞苷、巯嘌呤、氟尿嘌呤等）：大部分由自然结构的核酸类半合成，发展为用化学-酶合成法制备。 A. 化学合成法 目的：以自然结构的核酸类物质作原料，半合成为其结构改造物，常与酶合成法同时使用。 B. 酶合成法：利用酶系统和模拟生物体条件。;总结：核苷酸、核苷及碱基的制备