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DH5α 化学感受态细胞——转化
1）取感受态细胞置于冰浴中融化，待完全化冻后轻轻混匀。如需分装，可将融化的细胞悬液转移到无菌、预冷的离心管中，置于冰浴中备用。混匀、分装时动作应轻缓，以防细胞破裂。
2） 向50~100微升细胞中加入目的DNA，轻轻混匀，冰浴中放置30min。注意：加入的体积以不超过感受态细胞体积的十分之一为宜。
3）将离心管转移至42℃水浴中热激60~90s，然后快速将离心管转移到冰浴中冷却2min。该过程不要摇动离心管。
4）向离心管中加入500~900微升无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃200rpm左右振荡培养45~60min，使菌体复苏并表达质粒上的抗生素抗性基因。
5）根据实验要求，取适量转化后的菌液加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。待液体被完全吸收后，37℃倒置培养约16h。
注意：涂布量的选择应根据目的DNA的性质和浓度适当进行调整，通常可按下述方法涂布：
a. 目的质粒DNA在1ng左右时，90mm平皿可涂布100微升，55mm平皿可涂布50微升；目的质粒浓度较高时，应相应减少涂布量。
b. 连接产物的转化菌液可通过4000rpm离心1~2min后，吸除大部分上清，用剩余的100~200微升上清重悬菌体，涂布于同一块琼脂平板上。
注意事项
1. 溶化后的感受态细胞应及时进行转化，以免降低转化效率；融化后不宜再次冻结保存。
2. 整个过程要轻柔，避免移液枪吹吸。
3. 请使用传热性能好的薄壁试管或离心管，换不同的试管或离心管时，应摸索热激时间，以获得最佳转化效率。
4. 请保留剩余的连接转化液，以便在转化实验不成功时重新进行转化。
5. 经验表明，使用SOC培养基复苏比使用LB培养基复苏的转化效率高约一倍以上。
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