生物制药与药品检验技术 寻找病毒“克星”系列之2—RNA的制备 课件：核酸类药物原料制备方法2-RNA的制备.pptx

;项目三 核酸类药物的原料制备与分析检验;寻找病毒“克星”核酸类药物的原料制备方法 --RNA的制备;学习内容： （1）材料的选择与预处理 （2）RNA的提取与纯化 （3）混合RNA的分离纯化 学习重点： RNA的提取、分离与纯化方法;一、材料的选择与预处理 ;广泛分布在烂菜、青贮饲料、泡菜、有机肥、动物粪便、各种乳制品和土壤等处。 用途：可用于处理发酵工业和食品加工业的有机废水并生产药用、食用或饲用单细胞蛋白。;RNA提取的预处理：与DNA提取类似。 加入0.14mol/L氯化钠溶液去除??DNA的沉淀，留下含RNA的核糖核蛋白（RNP）。 调节溶液pH值为4.5，使核糖核蛋白沉淀析出，RNA仍留在溶液中。 ;RNA需进行含量测定的预处理方法。 材料--组织匀浆器捣碎-稀三氯乙酸或过氯酸处理--残留物用有机溶剂（乙醇、乙醚、氯仿等）处理，除去脂溶性含磷化合物（磷脂类物质）。 留下的沉淀物为不溶于酸的非脂类含磷化合物：RNA、DNA、蛋白质、少量其它含磷化合物。 经酸或碱处理后，将RNA与DNA分开。处理后的提取液中为RNA，沉淀物中为DNA和蛋白质等物质。;酸处理法：1mol/L 过氯酸溶液 碱处理法：1mol/L 氢氧化钠溶液 ;乙醇沉淀法 去垢剂处理法 酚法（用途最广）;乙醇沉淀法 核糖核蛋白--碳酸氢钠溶液--含辛醇（辛醇用作泡沫剂）的氯仿--蛋白质和核酸--核酸留在水溶液中--上清液中的RNA--乙醇--钠盐沉淀 乙醇--核糖核蛋白变性--10%氯化钠溶液--上清液--2倍体积的乙醇--RNA沉淀;去垢剂处理法 核糖核蛋白溶液--1%十二烷基硫酸钠（SDS）、乙二胺四乙酸钠（EDTA）、三乙醇胺、苯酚、氯仿--上清液--乙醇--沉淀RNA 2mol/L盐酸胍溶液--溶解蛋白质--0℃--RNA沉淀--去垢剂处理 ;酚法（用途最广） 细胞破碎--匀浆--含水苯酚--振荡--水层--乙醇--磷酸盐缓冲液--α-甲氧乙醇（2-甲氧乙醇）--乙醇--RNA制品 冷酚法、热酚法、皂土酚法;混合RNA可直接作为药物使用，如以动物肝脏为原材料制备的RNA可作为治疗慢性肝炎、肝硬化等疾病的药物。 有时需要均一性的RNA，其分离纯化方法与DNA类似。;用于乙肝的辅助治疗;总结：大分子RNA的制备方法