基因工程的基本操作程序 2.ppt

（三）化学方法人工合成目的基因 质粒 DNA 分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA 连接酶 重组 DNA 分子（重组质粒） 同一种 1. 过程 : 二、构建 表达 载体—核心 2. 目的 （ 1 ）使目的基因在受体细胞中稳定存在并可以遗传 给下一代； （ 2 ）使目的基因能够表达和发挥作用。 3. 基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a 、目的基因 b 、启动子 c 、终止子 d 、标记基因 启动子 ： 位于基因的首端的一段特殊 的 DNA 片断，它是 RNA 聚合酶识别和结 合的部位，有了它才能 驱动基因转录 出 mRNA ，最终获得蛋白质 终止子 ： 位于基因的尾端的一段特殊 的 DNA 片断， 能终止 mRNA 的转录 标记基因 的作用是 为了 鉴别 受体细胞 中是否含有目的基因，从而将有目的 基因的细胞筛选出来 三、将目的基因导入受体细胞 ? 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母 菌和动植物细胞等。 （一）转化： 目的基因进入 _________ 内，并且在受体细 胞内维持 _____ 和 _____ 的过程 受体细胞 稳定 表达 （二） 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 （ 1 ）农杆菌转化法 ①特点： 易感染双子叶植物和裸子植物， 对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理： Ti 质粒上的 T-DNA 可以转移到受体细胞，并整合到 受体细胞染色体的 DNA 上。 1. 将目的基因导入植物细胞 ③转化过程 : Ti 质粒 目的基 因 构建 表 达 载 体 导入 植 物 细 胞 插入 植物细 胞染色 DNA 表达 新 性 状 转入 农 杆 菌 1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程的基本操作程序 ? （ 1 ）目的基因的获取 ? （ 2 ） ? （ 3 ）将目的基因导入受体细胞 ? （ 4 ）目的基因的检测与鉴定 基因 表达载体 的构建 一、目的基因的获取 1 、目的基因：主要指的是编码蛋白质的 结构基 因 ，也可以是一些具有调控作用的因子。 2 、获取方法： （ 1 ）从 基因文库 中获取目的基因； （ 2 ）利用 PCR 技术扩增目的基因； （ 3 ）通过 DNA 合成仪用化学方法直接合成 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与 RNA 聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不能转录为信使 RNA ，不能 编码蛋白质。 ：能转录相应的信使 RNA ，能 编码蛋白质 编 码 区 非 编 码 区 原核细 胞的 基因结 构 ②有调控遗传信息表达的核 苷酸序列，在该序列中， 最重要的是位于编码区上 游的 RNA 聚合酶结合位点。 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 启动子 终止子 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 内含子： 外显子： 真 核 细 胞 的 基 因 结 构 编码区 非编码区 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 ：有调控作用的核苷酸序列， 包括位于编码区上游的 RNA 聚合酶结合位点。 非编码序列： 包括非编码区和内含子 结构基因 外显子 内含子 转录、加工修饰 mRNA 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____ 的 编码区是间隔的、 _____ 的 相同点 都由能够编码蛋白质的 _____ _ 和具有调 控作用的 ______ 区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞 与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 基因表达的计算 ? 在真核生物中，对应的是 的碱基数 DNA mRNA 蛋白质 转录 翻译 6 3 1 氨基酸数 碱基数 基因中外显子 （一）从基因文库中获取目的基因 1. 基因文库： 概念 2. 基因文库的分类 : 按外源 DNA 片段的来源分类 种 类 基因组文库： 含有一种生物的 全部 基因 部分基因文库： 只包含了一种生物的 部分 基因， 如： cDNA 文库 3. 基因文库的目的 不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的 目的基因。 4. 基因文库的构建方法 （ 1 ） 鸟枪法 （ 2 ） 反转录法 （ 3 ） 根据已知的氨基酸序列合成 DNA 法 人 工 合 成 法 （ 真核生物 ） 多用于原核生物。为什么？ 直接分离法 提取某种生物的全部 DNA 用适当的限制酶切 一定大小的 DNA 片段 将 DNA 片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 （ 1 ）直