实验一 CTAB法提取植物基因组DNA.pptxVIP

实验一 CTAB法提取植物基因组DNA实验目的：学习从植物组织中（幼叶）提取基因组DNA的基本原理和方法。 实验原理：采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶 类（尤其是氧化酶类），其对DNA的抽提产生不利的影响，所以在抽提缓冲液中 需加入抗氧化剂或强还原剂（如巯基乙醇）以降低这些酶类的活性。在液氮中研 磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一 种阳离子去污剂，可溶解细胞膜并与核酸形成复合物。该复合物在高盐的溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提， 去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀（CTAB能溶于乙醇）即可使核酸 分离出来。CTAB溶液在低于15度时会形成沉淀洗出，因此再将其加入冰冷的植物材料 中之前必须预热（65度），且离心温度不要低于15度。实验步骤：1、取幼嫩的植物叶片（3-5g）剪碎液氮研磨成粉，转入1.5ml离心管内。加 入等体积的65℃预热的DNA提取缓冲液置于65℃的恒温水浴摇床上1-2h(1.5h)。 2、加入等体积的氯仿：异戊醇(24：1)，轻轻上下颠倒5分钟，静置5分钟，之后于12000rpm离心10分钟。3、吸取上层水相，重复步骤2一次。4、吸取上层水相，加入预冷2/3体积的异丙醇，