大肠菌群及大肠杆菌检测方法.docx

出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法 Method for examination of coliform ， fecal coliform and escherichia coli in food for export SN 0169 —92 代替 ZB X09 002 — 86 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。本标准适用于出口食品的检验。 设备和材料 2.1 吸管： 1mL ，具 0.1mL 刻度； 5mL 和 10mL ，具 1mL 刻度。 2 2 水浴箱： 44.5 ±0.5℃。 2.3 培养箱： 36±1℃， 44.5 ±0.5℃。 2.4 冰箱： 0～5℃和 -15 ～ -20℃。 2.5 均质器。 2.6 乳钵和研棒。 2.7 平皿：直径 90mm。 2.8 天平：感量 0.1g。 2.9 显微镜。 2.10 稀释瓶： 100mL 、 200mL 和 500mL 三角烧瓶及广口瓶。 2.11 玻璃珠：直径约 5mm 。 2.12 菌落计数器。 培养基及试剂 3.1 月桂基硫酸盐胰蛋白 (LST) 肉汤。 3.2 煌绿乳糖胆盐 (BGLB) 肉汤。 3.3 EC 肉汤。 3.4 伊红美蓝琼脂 (EMB) 。 3.5 营养琼脂斜面。 3.6 色氨酸肉汤。 3.7 MR-VP 培养基。 3.8 Korser 氏枸椽酸盐肉汤。 3.9 结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) 。 3.10 Butterfield 氏磷酸盐缓冲稀释液。 3.11 生理盐水。 3.12 革兰氏染色液。 3.13 Kovacs 氏靛基质试剂。 3.14 甲基红指示剂。 3.15 Voges—pros kauer(V —P)试剂。 样品制备 4.1 以无菌操作取有代表性的样品。如有包装则用品置于 -15℃保存； 非冷冻而易腐的食品， 应置于  75％乙醇在开口处擦拭后取样。若不能及时检验，应将冷冻样 4℃冰箱保存。 检验前冷冻样品可于 2— 5℃ 18h 内解冻，或在  45℃ 以下  15min  内解冻。 4.2 不同食品样品匀液的制备 4.2.1 液体食品 以灭菌吸管取样  25mL  放入装有  225mL  稀释剂的灭菌玻璃瓶  (瓶内预置适当数量的玻璃珠  ) ，以  30cm 幅度、于  7s 内振摇  25 次 (或以机械振荡器振摇  )，制成  1 ： 10 的样品匀液。 4.2.2 固体和半固体食品 以无菌操作取 25g 品，放入装有 225mL 稀 的 菌均 杯内，于 8000r ／ min 均 1～2min ，制成 1： 10 品匀液 (也可用 菌乳 研磨的方法代替)。 4.3 稀 品匀液根据 品 染情况的估 ， 用稀 将 品匀液制成一系列十倍 增的 品稀 液， 如 10-2、 10-3、 10-4. ??? 。从制 品匀液至稀 完 ，全 程不得超 15min 。 5 大 菌群的 定 5.1 大 菌群 MPN 的 定 5.1.1 每个 品， 适宜的三个 稀 度的 品稀 液。每个稀 度接种三管月桂基硫酸 胰蛋白 (LST) 肉 ，每管接种 1mL 。 5.1.2 将接种管置于 36±1℃培养 48±2h。 5.1.3 察 管的 气情况： 倒管内是否有气泡 生， 在 24h 和 48h 内 气的 LST 肉 管数。 如所有 LST 肉 管均未 气， 可 告 大 菌群阴性；如有 气者， 一步作 。 5.2 大 菌群的 5.2.1 将所有 气管用直径 3mm 的接种 移种到煌 乳糖胆 (BGLB) 肉 管中。 5.2.2 置 BGLB 肉 管于 36±1℃培养 48±2h。 5.2.3 所有 BGLB 肉 管的 气管数。 5.2.4 果 告：按 BGLB 肉 气管数， MPN 表 ( 附 B( 充件 )) 告每克 (毫升 ) 品中大 菌群的 MPN 。 大 菌群 定 6.1 用直径 3mm 的接种 将所有 48±2h 内 气的 LST 肉 管培养物移种于 EC 肉 管中。 6.2 将所有接种的 EC 肉 管在 30min 内放入 盖 44.5 ±0.5℃水浴箱内， 培养 24±2h。水浴箱的水平面 高于肉 培养基液面。 以已知 44.5℃ 气阳性的大 杆菌和 44.5℃不 气的 气 杆菌或其他大 菌群 菌作阳性和阴性 照。 6.3 EC 肉 管的 气情况。 气管 大 菌群 阳性；不 气管 大 菌群 阴性。 6.4 果 告：按 气管数， MPN 表 告每克 (毫升 ) 品中 大