流式细胞仪检测细胞周期操作步骤.pptxVIP

流式细胞仪检测细胞周期操作步骤 取对数生长期的 A549 细胞，按 1×106 cells/ mL 以 1mL 接种于 100mm 培养皿内 ↓ 24h 后，进行所需的处理（比如加药,照射） ↓ 特定时间后终止培养，进行下一步的实验 ↓ 收集原培养液，洗后的 PBS 和消化后的细胞，将三者混匀放入 15ml 离心管中 ↓ 1000rpm 离心 5min（短时低速离心） ↓ 弃上清，用 1.5ml 预冷 PBS，1000rpm 离心 5min 后去除 PBS 和细胞 悬液内的细胞碎片 ↓ 加入 1.5ml 预冷 PBS,在涡旋状态下加入 3.5ml 无水乙醇，混匀 后，于 4℃固定 30min,或-20℃长期保存。 ↓ 1000r/min,离心 5min ;2;↓ 流动室内充满鞘液，细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱 ↓ 液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光（488nm 激 发光源） ↓ 荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析（荧光染料和细胞 DNA 分子特异性结合，可以检测出细胞周期各时相细胞比例） ↓ 在用第三方软件分析之前，将流式结果按如下所示导出 ;; ; ;正态分布，S 期可以认为是一个加宽的正态分布 ;;;10;在 1 h 内用流式细胞仪检测