2020简并引物设计方法与技巧.pptVIP

引 物 设 计 ? 引物 ? 引物的重要性 ? 引物设计的原则 ? 引物与 PCR ? 引物设计软件 ? 如何使用 Primer Premier 5.0 ? 引物同源性分析 引物（ primers) ? 引物是人工合成的两段 寡核苷酸序列，一个引 物与感兴趣区域一端的 一条 DNA 模板链互补， 另一个引物与感兴趣区 域另一端的另一条 DNA 模板链互补。 → ← 3 3 5 5 Sense primer Antisense primer 引物的重要性 ? 在整个 PCR 体系中 , 引物占有十分重要的 地位。 PCR 的特异性要求引物与靶 DNA 特异结合，不与其他非目的 DNA 结合， PCR 的灵敏性要求 DNA 聚合酶能对引物 进行有效的延伸，可见引物设计好坏与 PCR 结果密切相关。 引物设计原则 ? 引物长度 ? 碱基分布的均衡性 ? Tm 值 ? 引物二级结构 ? 引物 3 端 ? 引物 5 端 ? 引物的内部稳定性 ? 引物的保守性与特异性 ? 扩增区域的二级结构 引物长度 ? 一般为 15-30 个核苷酸，在做长片段 PCR 或做某些特殊的 PCR 时应使用较长的引 物，但最多不超过 50 个核苷酸。 碱基