pcr扩增目的基因.pptVIP

任务二：PCR扩增目的基因 一、实验目的 1、掌握PCR扩增DNA的技术与原理 2、学习PCR扩增仪的使用 二、实验原理 聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术，具有灵敏度高、特异性强、操作简便和应用广泛等特点。 PCR工作原理类似于DNA的体内复制过程，是将待扩增的DNA片段和与其两侧的已知序列合成两个与模板DNA互补的寡核苷酸作为引物，引物序列将决定扩增序列片段的特异性和片段长度。 三、实验仪器 PCR扩增仪 台式高速离心机 移液器 高压灭菌后的Eppendorf管（0.5mL ） 电泳仪 四、材料与试剂 1、模板DNA（0.1μg/μL）：用牙签挑取单 菌落悬浮到50μL的裂解液中（1%TritonX- 100，20mmol/LTris-HCLpH8.2，2mmol/L EDTA），95℃温浴10min，10000r/min 离心5min，取2μL上清液用于总体积50μL的PCR反应。 五、实验操作 六、注意事项 1、PCR结果若出现非特异性的扩增条带，有 必要进一步优化反应条件，包括改变退火 温度和时间，调整Mg2+浓度等。 2、PCR反应特异性强，引物浓度、TaqDNA聚合酶和dNTP的量不宜过多。 3、引物设计要合理。 * 标准的PCR过程分为三步： 　　1.模板变性（92℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DN