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耐缺氧功能检验方法 1 常压耐缺氧实验 1.1 原理 缺氧对机体是一种紧张性刺激，影响机体各种代谢，特别是影响机体的氧化供能，最终会导致机体的心、脑等主要器官缺氧供能不足而死亡。 1.2 材料 250mL磨口瓶、秒表、凡士林、钠石灰（或等量氢氧化钠和碳酸钙）。 1.3 实验动物 推荐用近交系成年小鼠，单一性别，18－22g，每组10－15只。 1.4 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个阴性对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 1.5 实验步骤 各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，将各组小鼠分别放入盛有5g钠石灰的250mL磨口瓶内（每瓶1只），用凡士林封瓶口，盖严，使之不漏气，立即计时，以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。 1.6 统计方法及结果判定 缺氧时间为计量数据，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 受试样品组与对照组比较，存活时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。 1.7 注意事项： 1.7.1 每个磨口瓶内最好只放1只小鼠，以防互相干扰影响耐缺氧能力的测定。 1.7.2 磨口瓶一定要密闭封严，以防漏气，否则会影响实验结果。 1.7.3 磨口瓶必须等容量（误差?1mL），实验前先用水加以校正。 1.7.4 每批实验动物的体重应尽量保持一致。 2 亚硝酸钠中毒存活实验 2.1 原理 亚硝酸钠使正常二价铁血红蛋白转变为三价铁血红蛋白，破坏血红蛋白携氧能力，造成组织缺氧死亡。 2.2 材料 亚硝酸钠、秒表、1mL注射器 2.3 实验动物 推荐用近交系成年小鼠，单一性别，18-20g，每组10－15只。 2.4 剂量分组 同1.4 2.5 实验步骤 各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，各组动物按200－240mg/kg BW剂量腹腔注射亚硝酸钠 （注射量为0.1mL/10g），立即计时，记录动物存活时间。 2.6 统计方法及结果判定 存活时间为计量数据，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 受试样品组与对照组比较，存活时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。 3 急性脑缺血性缺氧实验 3.1 原理 动物断头后，由于脑供血终止，在短时间内脑中原有的血液和营养物质尚能使脑功能维持短暂时间，显示出有规律地张口喘气，以喘气时间为指标，可观察受试样品对脑缺血性缺氧的保护作用，凡能使脑耗氧降低的受试样品，均能延长动物喘气时间。 3.2 材料 剪刀、秒表 3.3 实验动物 同1.3 3.4剂量分组 同1.4 3.5 实验步骤 各剂量组经口连续给予不同浓度受试样品，对照组给予同等容量溶剂，于末次灌胃后1小时，各组动物自颈部逐只断头，立即按秒表记录小鼠断头后至张口喘气停止时间。 3.6 统计方法及结果判定 喘气停止时间为计量数据，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 受试样品组与对照组比较，喘气时间延长，并具有统计学意义，则判定该实验结果阳性。 3.7 结果判定 常压耐缺氧实验、亚硝酸钠中毒存活实验、急性脑缺血性缺氧实验三项实验中任二项实验结果阳性，可判定该受试样品具有耐缺氧功能的作用。 3.8注意事项 3.8.1 断头用的大剪刀必须锋利，断头时操作要敏捷，捉拿小鼠不宜反复多次或捉拿时间过长。 3.8.2 断头部位在小鼠耳根后部，切勿损伤延脑，否则断头后小鼠不显现喘气活动。