保健食品对电离辐射危害有辅助保护功能检验方法2020.docxVIP

对电离辐射危害有辅助保护功能检验方法 1 外周血白细胞计数实验 1.1原理 外周血白细胞数减少是一次性全身γ射线照射引起辐射损伤的表现之一，在一定范围内，照射剂量与外周血中白细胞数成反比，恢复时间与外周血中白细胞数成正比，外周血中白细胞数可代表血液系统受损的状况。 1.2仪器和试剂 20μL定量取血管、血球计数板、显微镜、1%盐酸等。 1.3实验方法 1.3.1 实验动物：小鼠，18－22g，单一性别，每组10－15只。 1.3.2 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个辐射模型对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品于照射前给予14－30天，照射后仍然给予受试物，必要时可延长至45天。 1.3.3 实验步骤 受试样品组于照射前后经口连续给予受试样品，剂量组与辐射模型对照组均以同一剂量γ射线全身照射一次，照射剂量宜选择3Gy－5Gy。分别于照射前、照射后第3天、照射后第14天三次采末梢血20μL，加入0.38mL 1%盐酸中，混匀后，加入血球计数板中，计算计数池中四个大方格中白细胞总数。 四个大方格中白细胞总数 白细胞数（109/L）= ×稀释倍数×107 4 1.4 数据处理及结果判定 白细胞数为计量资料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 照射前的外周血白细胞计数，用于各组间白细胞数目的均衡性检验，剂量组与辐射模型对照组比较，差异无显著性，再进行照射及后续实验。 照射后3天辐射模型对照组的白细胞数分别与照射前进行自身比较，差异有显著性，则判定辐射损伤模型成立；任一时间点、任一剂量组与辐射模型对照组比较，白细胞总数增多，差异有显著性，则可判定该实验阳性。 2．骨髓细胞DNA含量或骨髓有核细胞数实验 2.1原理 骨髓细胞DNA含量或骨髓有核细胞数降低是一次性全身γ射线照射引起辐射损伤的表现之一，在一定范围内，照射剂量与骨髓细胞DNA含量或骨髓有核细胞数成反比，恢复时间与骨髓细胞DNA含量或骨髓有核细胞数成正比，骨髓细胞DNA含量或骨髓有核细胞数可代表造血系统受损的状况。 2.2仪器和试剂 血球计数板、显微镜、注射器、手术器械、紫外分光光度计、Hank’s液等。 2.3实验方法 2.3.1 实验动物：小鼠，18－22g，单一性别，每组10－15只。 2.3.2剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个辐射模型对照组，以人体推荐量的10倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组。受试样品于照射前给予14－30天，照射后仍然给予受试物，必要时可适当延长至45天。 2.3.3 实验步骤 受试样品组于照射前后经口连续给予受试样品，剂量组与辐射模型对照组均以同一剂量γ射线全身照射一次，照射剂量宜选择3Gy－5Gy。于照射后第3天，颈椎脱臼处死动物，剥离出股骨，用1mL注射器（6.5号针头）吸取一定体积的Hank’s液，冲出股骨中的全部骨髓细胞；最后，让细胞悬液通过4号针头的注射器，使细胞在悬液中充分分散。 镜下计数。计算每mL骨髓细胞悬液中的有核细胞数。 或用紫外分光光度计260nm处测定DNA含量。 2.4 数据处理及结果判定 骨髓有核细胞数或骨髓细胞DNA含量为计量资料，采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 任一剂量组与辐射模型对照组比较，骨髓有核细胞数或骨髓细胞DNA含量增多，差异有显著性，则可判定该实验阳性。 3 小鼠骨髓细胞微核实验 3.1 原理 骨髓细胞微核数增高是一次性全身γ射线照射引起辐射损伤的表现之一，在一定范围内，照射剂量与骨髓细胞微核率成正比，恢复时间与骨髓细胞微核率成反比，骨髓细胞微核数可代表机体染色体受损的状况。 3.2 仪器和试剂 解剖器械，生物显微镜，载玻片等。 小牛血清：小牛血清滤菌后放入5