生物制药与药品检验技术 蛋白质分离提纯“三步走” 课件： 蛋白质分离提纯的一般原则.pptxVIP

;项目一 血清蛋白类药物的原料制备与分析检验;从个体到一般 --蛋白质分离提纯的一般原则 ;学习内容： （1）蛋白质分离提纯的一般程序 （2）前处理 （3）粗分级 （4）细分级 学习重点： 前处理、粗分级与细分级的方法;一、蛋白质分离提纯的一般程序 ;前处理（pretreatment）：把蛋白质从组织或细胞中释放出来，并保持原来的天然状态 选择适当的方法，将组织（tissue）和细胞（cell）破碎;动物组织和细胞：电动捣碎机或匀浆器破碎，超声波提取法（ultrasonicaction）破碎 如：猪肝中DNA的提取;植物组织和细胞：有细胞壁（纤维素、半纤维素和果胶等物质），用石英砂和提取液一起研磨的方法破碎或用纤维素酶（cellulase）处理 如：植物叶片中叶绿素的提取 ;破碎细菌：超声波振荡，与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理（分解肽聚糖）等 ;粗分级（rough fractionation）：将要的蛋白质与其他杂蛋白分离开来 方法：盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等 ;特点：简便、处理量大，既能除去大量杂质，又能浓缩蛋白质溶液 如：血清蛋白的分级盐析—白蛋白、IgG;细分级（fine fractionation）：进一步提纯 方法：层析法（凝胶层析，离子交换层析，吸附层析，亲和层析等） ;必要时，选择电泳法作为最后的提纯步骤 如：猪血清蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离;方法一般规模较小，分辨率高 结晶是蛋白质分离提纯的最后步骤：纯度的标志，断定制品处于天然状态的有力指标 ;总结：蛋白质分离提纯的一般原则