医学类-艾滋病试验室检测新技术.ppt

艾滋病实验室检测新技术 蒋岩 中国 CDC 性病艾滋病预防控制中心 二十一世纪第二届全国性病暨皮肤病学术研讨会 目的 方法 监测 感染检测 抗体检测 (EIA/PA/RT) 检测策略 窗口期检测 抗原检测 , 核酸检测 pooling RT-PCR 诊断 感染诊断 WB 检测策略 近期感染诊断 STARSH 方法 治疗评价 CD4/CD8 测定 流氏仪检测 显微镜法 病毒载量测定 NASBA, b-DNA,RT-PCR 耐药性检测 基因型 , 表型 窗口期检测 抗原检测 核酸检测 Pooling RT-PCR 方法 窗口期的范围 定义依据 时间长度 抗体检测 3-6 个月 新的 EIA 试剂可以缩短至 14-21 天 抗原检测 1-2 周 第四代抗原抗体检测试剂可以 使窗口期比第三代抗体试剂缩 短 4-5 天 核酸检测 5-11 天 抗原检测 P24 试剂盒 , 第四代 EIA 试剂 (1997 年在欧洲正式批 准用于血液筛查 ) 每一个 HIV 粒子含有 1200 个 p24 抗原分子 =0.048fg 每一个 HIV 粒子含有 2 个 RNA 拷贝 , 如果病毒载量测 定结果为 400 拷贝 /ml, 即等于有 2.4X10 5 个分子 =0.0096pg p24 抗原 /ml,800 拷贝 /ml, 即等于有 4.8X10 5 个分子 ==0.019pg p24 抗原 /ml 目前最敏感的抗原检测试剂盒的检测阈值为 0.01pg/ml 抗原在血清抗体阳转前 2-18 天既可以检测到 样本 ( 血清 / 浆 ) 中的 p24 抗原包括游离的抗原和病毒粒子中 的抗原 EIA 测定的抗原浓度 (F): 病毒 RNA 拷贝数推算的抗原浓 度 (A)=0.16:2900 样本号 EIA(Cutoff) EIA(pg/ml) RNA 拷贝 /ml p24pg/ml F/A 1 3.1 0.1 1,400 0.03 3.1 2 4.7 0.16 3700 0.09 1.8 3 45 1.5 11000.03 56 4 320 11 80000 1.9 5.6 5 68 2.3 40000 0.96 2.4 6 22 0.73 190000 4.5 0.16 样本经过预处理 , 破碎病毒粒子后将有利于 p24 抗原的检测 病毒 RNA 检测 第一次病毒学症高峰时间大约在感染后 4-11 天 病毒 RNA 检测方法 :NASBA,RT-PCR,b-DNA 在高度怀疑有原发感染时 , 且经抗体检测之后 抗体检测阴性或不确定 , 有高危行为史或暴露 史 , 特别是伴有相应的临床表现时 , 用核酸检 测进行辅助诊断。 早期诊断应用 : 个体检测、血液筛查、性病 门诊病人筛查、 PMTCT Pooling RT-PCR 由于核酸检测的成本很高 , 方法费时 , 不可能作为血 液筛查的方法 , 目前在欧洲用 pooled 血液的方法进行核酸 检测 , 其敏感性取决于 pooped 样本大小及检测的预值 ( 用特 殊的 RT-PCR 试剂盒检测 , 以提高敏感性 ) 。可能低于抗原 检测 , 但在个体献血者核酸检测可能比抗原检测更具成本 效益。 ① ② 131 份 EIA+ 1342 份 EIA- 1230 份抗体 EIA- Pooled 1230 份抗原抗体联合 1473 份样本 65 份量不足 47 份溶血 1 份 HIV RNA+ HIVEIA - WB- ab/abag(-) PA(-) 6 份抗原抗体联合 + 6EIA- 1gp160 p17 6P24- HIV RNA- 1473 份样本处理过程 HIV RNA (copies/ml) HIV RNA (copies/ml) HIV Ab WB P24 HIV Ag/Ab 一级 Pool 251-300 # 1.65*10 3 NT NT NT NT NT 二级 Pool 251-260 # 1.40*10 4 NT NT NT NT NT 单样本 256 # 6.74*10 4 NT - - - - 新近感染检测 抗体检测 ──EIA,PA,RT──WB 试验 阴性 ── 抗原检测 / 核酸检测 阳性 ──STARSH── 新近感染 STARHS 法 1998 年开始 , 美国 Janssen RS 等专家推出一种新的 实验室方法用于新感染病