微生物检验技术、教学服务模块 肠杆菌科鉴定、课件、标准化理论课件 项目15：肠杆菌科鉴定.pptx

微生物检验技术;;1.掌握肠道杆菌的共同特性 2.掌握肠杆菌科细菌的生物学性状 3.掌握大肠埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属的鉴定程序及鉴定方法;单元; 肠杆菌科 ;概述;;;;;;;;;;;;; 大肠埃希菌 ;;;;;;;;;;埃希菌鉴定程序： 肠外感染：尿沉渣、脓汁标本 涂片染色镜检 分离培养 生化鉴定 *尿路感染需计数中段尿细菌总数 ＞10万/ml 肠内感染：SS、麦康凯培养基分离培养 生化鉴定;;; 吲哚试验;甲基红试验; VP试验;大肠杆菌：- 产气杆菌：+;阳性 阴性; 硝酸盐还原试验 ; KIA上生长现象; 埃希菌属IMViC试验;;沙门菌属;;;;;;伤寒沙门菌在MAC和血平板上生长; 在SS琼脂上，产生H2S生成黑色化合物。;在双糖铁上的生长现象; 在双糖铁上的生长现象 ;对照;沙门菌IMViC试验（－＋－－）;;; 血清学鉴定; ;;志贺菌属;;;;;;;志贺菌在MAC和SS培养基上生长;动力试验;在双糖铁上的生长现象; 常用鉴定试验;志贺菌IMViC试验（－＋－－）; 血清学试验 ;;标本 取材应挑取粪便的脓血或粘液部分。若不能及时送检，宜将标本保存于30%甘油缓冲盐水或专门运送培养基内。中毒性痢疾患者可取肛拭。 分离培养与鉴定 标本接种于肠道鉴别或选择培养基上，37℃孵育18-24小时。挑取无色半透明可疑菌落，作生化反应和血清学试验，以确定其菌群（种）和菌型。 毒力试验 测定志贺菌的侵袭力可用Senery试验。系将受试菌18—24小时的固体培养物，以生理盐水制成9亿ml菌悬液，接种于豚鼠眼结膜囊内。若发生角膜结膜炎，则Senery试验阳性，表明受试菌有侵袭力。志贺菌ST的测定，可用HeLa细胞或vero细胞，也可用PCR技术直接检测其产毒基因stxA、stxB。;快速诊断法 1．免疫染色法 将粪便标本与志贺菌抗血清均匀，在光镜下观察有无凝集现象。 2．免疫荧光菌球法 将标本接种于含有荧光素标记的志贺菌免疫血清液体培养基中，37℃孵育4-8小时。若标本中含有相应型别的志贺菌存在，则生长繁殖后与荧光抗体凝集成小球，在荧光显微镜下易被???出。 3．协同凝集试验 是以志贺菌IgG抗体与Cowan I葡萄球菌结合成为试剂，用来检测病人粪便中有无志贺菌可溶性抗原。 4．胶乳凝集试验 用志贺菌抗血清致敏胶乳，使与粪便中的志贺菌抗原起凝集反应。也可用志贺菌抗原致敏胶乳，来诊断粪便中有无志贺菌抗体。 5．分子生物学方法 PCR技术、基因探针检测140MD的大质粒等。　 ;;克雷伯菌属;;;;;;肺炎克雷伯菌在血平板和MAC上生长;肺炎克雷伯菌粘丝试验;IMViC:- - + +;丙二酸盐试验;KIA;肠杆菌属　;;;;;;;变形杆菌属　;;Text;;;标本（脓、尿、分泌物）;（普通琼脂平板）; ;苯丙氨酸脱氨酶试验：+ 尿酶试验：+ H2S试验：+ 明胶液化试验：+ 酯酶试验：+;变形杆菌KIA（KA+ + ）MIU（+ +/- +）;变形杆菌苯丙氨酸脱氨酶试验（＋）;;试 验;;;