利用根癌农杆菌T-DNA插入突变寻找参与漆酶葡萄糖阻遏的关键基因.docxVIP

Research Paper 研究 报告 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 52 ( 1) : 44 －51 ; 4 January 2012 ISSN 0001 －6209 ; CN 11 －1995 / Q http: / / journals im．．ac．cn / actamicrocn 利用 根癌农杆 菌 T- DNA 插入 突变寻找参 与漆酶葡萄糖阻遏 的关键 基因 李中明，潘皎 ，朱旭 东 * 南开 大学生 命科学学院微生物 ， 300071 系 天津 摘要: 【目的 】新型 隐 球酵母 ( Cryptococcus neoformans) 是人 类重要 致病真菌 ，主要毒性 因子 之一漆酶 的表达 受 葡糖糖阻遏 ，机制 未知 。 本文 拟寻找参 与葡萄糖阻遏 的 关键 基因。 【方法】建立根癌农杆 菌介导的 转化方法 ( Agrobacterium tumefanciens-mediated transformation ，ATMT ) 建立一个容 量约 200000 的随即 插入突变 文库 ，在高浓度葡萄糖 条件下从中筛选 葡萄糖 去阻遏 的 突变 株 。 通过 Southern 确定突变 株中 T- DNA 的拷贝 数，利用反向 PCR 获得依赖葡萄糖 的漆酶阻遏 基因 序列。【结果】筛选 到了 30 株葡萄糖 去阻遏突变