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Western blot 实验技术;定义：;Western Blot基本原理;Western Blot基本原理;Western Blot一般流程;通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白
水溶液提取法
针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统的水溶液
对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂 。
细胞裂解液： 0.5ml水+0.5ml裂解液+10μl蛋白酶抑制剂+ 10μl 泛酸钠+ 1μl pepstain
有机溶剂提取法
对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括乙醇、
丙酮和丁醇等。
通过层析或电洗脱法制备目的蛋白
;细胞数量达5×106个时就可以做WB。
将细胞裂解液在离心，收集上清液，加loading煮样5min
;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳;纯净水
丙烯酰胺和N,N’-亚甲双丙烯酰胺 ??
SDS
Tris-HCL
TEMED
过硫酸铵;凝胶浓度与蛋白分离范围;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项：;转膜;转膜;转膜注意事项：;封闭（1h）(封闭时间过短会导致背景过深 );一抗、二抗孵育;显色反应;化学发光，显影，定影 ; 凝胶图象分析 ;Western Blot常见问题分析;SDS电泳;条带比正常的窄？
“微笑”或“倒微笑”条带？;转膜及抗体检测;背景太高
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