实验四SDS聚聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量.pptVIP

实验四、SDS-聚丙蟠酰胺凝 胶电泳测定蛩白质分子量 0●● ●●●● ●●●● ●●●●● ●●●● ●●●● ●●●● 实验目的 ●●0 ●●● ●● 学习SDS测定蛋白质分子量的原理。 掌握垂直板电泳的操作方法。 运用SDS测定蛋白质分子量及染色鉴定。 ●●●● ●●●● ●●0 聚丙烯酰胺凝胶的聚合反应 ●●● ●● 单体:丙烯酰胺(Acr) 交联剂:甲叉双丙烯酰胺(Bis) 催化剂:过硫酸胺 加速剂:四甲基乙二胺( TEMED) 产物:三维网状结构的凝胶 ●●●● ●●●● ●●0 ●●● ●● ·PAGE根据其有无浓缩效应,分为连续系统和不连续 系统两大类。 ·连续电泳体系中缓冲液PH值及凝胶浓度相同,带电 颗粒在电场作用下,主要靠电荷和分子筛效应分离 不连续电泳系统中缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度 及电位梯度具有不连续性,带电颗粒在电场中泳动不 仅有电荷效应,分子筛效应,还具有浓缩效应,所分 离条带清晰度及分辨率较好。 ●●●● ●●●● 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 ●●0 ●●● ●● 凝胶层由浓度不同的两层凝胶组成:上层凝胶浓 度较低〔3%),为大孔径的浓缩胶,凝胶对溶质 的泳动无阻滞作用,溶质在此层得到浓缩;下层 8.3 凝胶浓度较高(5-25%),为小孔径的分离胶, 各个组分根据迁移率的差别分离 883 当蛋白质的pⅠ小于8-9.5时,一般电极缓冲液采