萌发麦苗水溶性蛋白含量的测定.docxVIP

附：萌发麦苗水溶性蛋白含量的测定（ Folin-酚法） 生物112周泓兆1102040226 陈晓宇 1110010409 一、 研究方案与可行性分析 本次实验与实验一的不同之处在于本次实验需要测定的是水溶性蛋白，而不是所有蛋 白。首先，我们需要除去不可溶蛋白；其次，即使是水溶性蛋白溶解度也很低，因此我们需 要设计浓度梯度来确定水溶性蛋白是否已全部溶解。 二、 具体实验设计 1、 制备一组浓度梯度的待测液： 称取萌发的小麦幼苗 10g于研钵中，加入适量石英砂， 研磨匀浆。将匀浆转移至50ml离心管中，加蒸馏水至50ml并搅拌均匀，分别吸取2ml、4ml、 6ml、8ml、10ml、12ml，均转移至具有编号 1-6的50ml离心管中，加适量蒸馏水浸提 30-60min , 在10000-12000r/min （最好在4C）条件下离心 20min，分别取出上清液，转移至 50ml容量 瓶后定容，摇匀，分别加入标有待测液 1-6的具塞试管中。 2、 用蒸馏水将1mg/ml BSA标准溶液稀释，得到250卩g/ml的BSA原液10ml。按照下 图配置一组溶液并进行处理： AvV 口 吕号 1 2 3 4 5 6 250卩 g/ml BSA原 液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 dH2O (ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 试剂甲 各 5ml，混匀，RT 10min 试剂乙 各0.5ml，立即混匀， RT 30min （2h内 稳定） 表1绘制标准曲线 AvV 口 吕号 7 8 9 10 11 12 13 14 15 待测液 待测液1 待测液2 待测液3 试剂甲: 各 5ml，混匀，RT 10min 试剂乙 各0.5ml，立即混匀，RT 30min （2h内稳定） AvV 口 吕号 16 17 18 19 20 21 22 23 24 待测液 待测液4 待测液5 待测液6 试剂甲「 各 5ml，混匀，RT 10min 试剂乙 各0.5ml，立即混匀，RT 30min （2h内稳定） 表2测定水溶性蛋白浓度 依据“平行量平行测”的原则，分别测量各管内溶液的 OD650，并将实验结果填入下表: 样品 标准曲线 管号 1 2 3 4 5 6 OD650  待测液1 待测液2 待测液3 AvV 口 吕号 7 8 9 10 11 12 13 14 15 OD 650 均值 待测液4 待测液5 待测液6 AvV 口 吕号 16 17 18 19 20 21 22 23 24 OD 650 均值 我们可以认为，若相邻两组待测液均值之比约为 1 : 2,则可认为水溶性蛋白已全部溶解。 可以用确认水溶性蛋白已全部溶解的待测液并结合稀释倍数计算萌发麦苗水溶性蛋白含量。 若这几组数据中出现 OD650大于标准曲线最高点，则全部稀释一倍后在进行比色。 参考资料： [1]邓丽莉，潘晓倩，生吉萍，申 琳.考马斯亮蓝法测定苹果组织微量可溶性蛋白含量的条件优化 J].食 品科学，2012(24) : 185-189