文冠果性别分化关键期microRNA及矿质营养研究.pdfVIP

摘要 摘要 文冠果（Xanthoceras sorbifolium Bunge ）为雌雄同株异花树种，因其综合利用价 值高被广泛种植。文冠果的雄能花数量远多于雌能花，由此导致的种子低产问题是其 种子利用产业发展的主要瓶颈，因此调控雌雄比例成为解决此问题的关键。本研究挖 掘了可能影响文冠果性别分化的关键microRNAs ；研究了文冠果性别分化过程中花芽 矿质元素及营养物质的变化；筛选出适于文冠果性别分化研究的内参基因。为通过分 子手段调节性别比例，进而提高种子产量提供理论依据。主要结果包括： （1）当文冠果花序伸长，花芽彼此明显分离时，雌、雄花芽中雌蕊和雄蕊同时 出现差异。雄能花雄蕊发育正常，雌蕊退化，胚珠和子房逐渐干瘪萎缩，柱头未出现 乳突状细胞；雌能花雌蕊发育正常，雄蕊退化，花粉发生液泡化衰败，无成型细胞核 且细胞质稀疏。 （2 ）共鉴定出归属34 个家族的1619 个保守miRNAs 及219 个novel miRNAs 。 其中，162 个保守miRNAs 和14 个novel miRNAs 在构建的4 个sRNA 文库 （雌、雄 蕊形态结构尚未出现差异及开始出现明显差异时顶芽和侧芽的sRNA 文库）中表达差 异显著。差异表达的miRNAs 中，预测到112 个miRNAs 所对应的1677 个靶基因， 这些靶基因参与多种发育和代谢过程。17 个miRNAs 与配子体发育相关，并且碳水 化合物代谢以及聚糖的生物合成和代谢是两种主要通路。验证了miR156 、miR159 和 miR319 等家族的功能，扩展了 miR393 、miR396 、miR162 、miR408 、miR2673 和 miR5169 等家族的功能。 （3 ）性别分化过程中，K 、Mn 、Cu 和Fe 在雄能花中含量总体上均高于雌能花。 雌、雄蕊发生败育后，K 、Mn 、Cu、Fe 及Mg 含量在雄能花中逐渐升高，在雌能花 中呈下降趋势。此时，Ca 在雄能花中含量开始高于雌能花，且随着分化的进行，含 量差距增大。6 种矿质元素有利于雄能花的形成。雌、雄蕊开始发生败育后，随着发 育进行，雌能花分化发育所消耗的淀粉和可溶性糖远高于雄能花，高含量的淀粉和可 溶性糖有助于雌能花的形成。 （4 ）7 个候选内参基因在不同组织中表达量差异显著，雌能花中表达均显著高 于其他材料，在雄能花的表达量较低。适用于性别分化过程研究的最优内参为 UBQ 和eIF-4α ，适用于不同器官的最优内参为EF-1α 和GAPDH。 I 文冠果性别分化关键期microRNA 及矿质营养研究 关键词：文冠果，性别分化，microRNA ，矿质营养，内参基因 II 目录 目录 引言 1 1 国内外研究进展 3 1.1 文冠果概述 3 1.1.1 文冠果形态学及生物学特征 3 1.1.2 文冠果分布特征 3 1.1.3 文冠果价值4 1.2 植物性器官败育研究进展 5 1.2.1 植物单性花的形成 5 1.2.2 植物雄性、雌性不育表现形式 6 1.2.3 植物败育的影响因素7 1.3microRNA 研究进展 8 1.3.1miRNA 特性及作用机制 8 1.3.2miRNA 参与植物性别分化的功能9 1.3.3miRNA 鉴定及分离方法 10 1.3.4miRNA 表达检测方法 11 1.3.5miRNA 功能分析方法 12 1.4 文冠果相关研究进展 12 1.4.1 文冠果性别分化研究进展 12 1.4.2 文冠果性别分化相关分子生物学研究基础 14 1.4.3 文冠果性别分化影响因素研究进展 16 1.5 研究目的与意义、技术路线 17 1.5.1 研究目的与意义 17 1.5.2 技术路线图 18 2 材料与方法 19