分析化学、教学服务模块 标准化理论课件、课件 9. 紫外-可见分光光度法.pptx

第九章 紫外-可见分光光度法;一、光的本质;光的折射; 光与物质作用产生吸收、发射和光电效应，说明光具有粒子性。; 所有的电磁波在本质上都相同，其区别仅在于波长（或频率）不同。将不同的电磁波按波长顺序排列起来得到电磁波谱。;波段; 可见光是人眼能感觉到的光，其波长大约在400-760nm之间。;光的颜色; 10nm～200nm的紫外辐射被大气吸收，在空气中不能传播。 故用于分析的是200nm～400nm之间的近紫外光。;3. 单色光与复合光;4. 互补色光;三、物质对光吸收的选择性;【互动与思考??;第二节 光谱分析法概述;利用物质分子内部发生能级跃迁所产生的光谱进行分析;线状光谱;分析基础：以分析分子内部能级跃迁所产生的光谱。;;分析基础：物质对不同波长的辐射选择性吸收。; 分析基础：以物质受辐射作用发生跃迁所发射的辐射进行分析。;二、紫外-可见分光光度法;■ 紫外-可见分光光度法特点：;【互动与思考】;;一、透光率;物质的透光率越大，则表明物质吸收的光越少，见下图：;二、吸光度;1. 透光率与吸光度的大小变化关系;2. 透光率与吸光度的定量换算关系;【示例】光线通过维生素B2溶液的透光率是50%，求维生素B2溶液的吸光度是多少？; 物质的吸光度与透光率是否是一种简单的反比例关系？;单色光波长(nm);物质的吸收光谱曲线; 吸收光谱曲线上比左右相邻都低之处称为吸收谷；吸收谷所在的波长为最小吸收波长，用“λmin”表示。;吸收光谱曲线上不成峰形、形状类似肩膀的小曲折称为肩峰；肩峰所在的波长用“λsh”表示。;1. 吸收光谱是物质固有的特征，不同物质的吸收光谱曲线一般不同。;2. 同种物质的吸收光谱特征值（ λmax 、 λmin 、λsh等）必定相同。;1. 作为定性分析的依据 ;2. 确定定量分析中的最佳测定波长;约翰·朗伯，德国数学家、天文学家、物理学家。; 平行单色光通过吸光性物质的溶液时，在溶液的浓度、入射光波长、强度及溶液的温度不变的情况下，溶液的吸光度A与溶液的厚度L成正比，即：;A＝K·C;A＝K·C·L;二、朗伯-比耳定律的适用范围;2. 适于测定的样品范围;3. 适用的光谱范围;三、吸光系数; 是指在入射光波长一定时，溶液浓度为1 mol/L，液层厚度为1cm时，所测得的吸光度，常用ε表示，单位是L/（mol · cm）。; 是指在一定波长下，当液层厚度为1cm，溶液浓度为1%（g/100ml）时，所测得溶液的吸光度，用“ ”表示，单位是100ml/g·cm。;;【示例】 氯霉素（M=323.15 g/mol）溶液在278nm处有最大吸收，用纯品配制100ml含有2.00mg的溶液，以1cm厚的比色皿在278nm处测得透光率T为24.3%。求氯霉素的百分吸光系数和摩尔吸光系数。;;■ 作用：提供入射光;■ 作用：将光源发出的复合光色散成所需波长的单色光。;■ 作用：盛装待测的样品溶液和参比溶液。;■ 作用：将通过溶液后的透射光强度大小转变为光电信号进行检测。;第七节 紫外-可见分光光度法的定性定量分析;试样;1. 定性的理论依据;将待测试样与标准品配成浓度相同或相近的溶液。;将测得的样品λmax、λmin和 值与文献收载的规定值比较即可鉴别。;;● 不同的物质可能具有相同的光谱特征数据，但因结构不同，吸收曲线必定不一样。; 如维生素B12的鉴别 《中国药典》（2015年版）规定：维生素B12的λmax =278nm、361nm和550nm，且A361/A278=1.70～1.88；A361/A550=3.15～3.45。;; ■ 若药品与杂质的吸收峰位不重叠，则药品中的杂质会使药品的吸收曲线变形。;■ 若药品与杂质的吸收峰位重叠，杂质的存在会使吸收峰处的吸光系数改变。; 《中国药典》（2015年版）规定：取每1ml含2mg的供试品溶液，于1cm吸收池在310nm处测定吸光度不得超过0.05。; 葡萄糖注射液是临床上常用的药品之一。制备时需要高温灭菌，葡萄糖会转化为5-羟甲基糠醛而引入杂质。《中国药典》（2015年版）规定葡萄糖注射液在284nm波长处的吸收度不得过0.32，以此控制其杂质5-羟甲基糠醛的量。 【解释】在284nm波长处葡萄糖无吸收，而杂质5-羟甲基糠醛在此波长处有最大吸收，可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸收度来控制杂质的含量。 ;1. 定量分析的理论依据;2. 单组分溶液的定量分析方法;;标准溶液的浓度;