PCR室室内质控标准操作程序.docVIP

PCR室室内质控标准操作程序 1.目的 控制实验的重复性、精密度，并检测其准确度的改变，提高本室常规工作中的批间、批内标本检测的一致性。 2. 适用范围 本程序适用临床基因扩增检验质量负责人和检验人员对DNA和RNA分析的室内质量控制。 3．制定依据 《临床基因扩增检验技术》申子瑜　李金明　主编　人民卫生出版社　2002年第一版 4. 职责 实验室质量负责人和检验人员负责本规程的执行。评估检测结果正确与否，判定当日结果是否可以被采用。 5、操作步骤 5.1血清质量控制品 a)质控品的来源：卫生部临检中心或试剂盒内质控品。 b)质控品与样本同时处理，排列顺序为：标准品或校准品，阴性质控品，阳性质控品，临床样本。 c)质控品的处理及分析判断。 d)实验结果的判断：实验结果合格，即发报告；实验结果不合格，报告室主任，会同有关人员，查找原因，妥善解决。 e) 记录每次检测质控结果。 f) 记录失控原因及纠正措施。 5.2室内质控图的使用方法： ①描点： a）图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。 对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。 b）每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。 c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。 ②图形分析 a）如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。 b）如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应立即向有关负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。 ③通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源 a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。这种变化往往是由于一个新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、 操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了那些变动的因素。 b）趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种变化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。 c)连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6天以上出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学原理，由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。连续6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5％。因此凡出现连续6天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般化验报告可以照常填发。 d)其他规律变化：（周期性等） 5.3通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源 a)每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和s与该批测定的X和s 进行比较。如果X发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同侧表明检测的精密度发生了变化。 b)将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐在月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。 5.4失控限的判定：当阳性对照呈假阴性或阴性质控呈假阳性时为失控；当阳性标本呈假阴性或阴性标本呈假阳性时为失控。此次实验结果不合格，报告室主任，会同有关人员，查找原因，妥善解决，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。 5.5阴性对照品失控的处理程序： 5.5.1阴性对照A、B为假阳性时，则应考虑为：a.试剂污染；b. 扩增产物的“污染”。可作以下实验鉴定：取4个空管打开静置于标本制备区60分钟，然后加入扩增反应混合液同时以水替代核酸样本进行扩增，如为阳性，而上述仅含扩增反应混合物的管为阴性，即可排除试剂污染的可能，表示实验室有扩增产物“污染”。此时，应立即报告实验室负责人，然后先暂时停止PCR实验，采取各种有效的消毒清洁工作直至产物污染彻底消失后才可进行PCR实验。如果有试剂污染时，应更换另一批号的试剂进行重复实验，待重复实验阴性质控品无失控后，方可报告结果。 5.5.2如果以上实验鉴定没有实验室的产物污染时，则应判断为实验操作过程中所致的标本间的交叉“污染”，出现这种情况很大程度上属于偶然误差，具体地说