浙江工业大学生物化学实验论文——对啤酒酵母的蔗糖酶的提取、提纯及测定研究论文.pdf

浙江工业大学生物与环境工程学院 生物化学实验论文 姓 名： 组 员： 学 号： 学 科： 食品科学 与工程 所在院系：生物与环境工程学院 指导教师： 邱乐泉 2012 年 12 月 1 日填 啤酒酵母蔗糖酶的提取、提纯及测定研究论文 摘要： 为了解酶的初步提取及纯化方法，并在此基础上掌握测定酶活力 的原理和方法；用 Folin-酚试剂、微量凯式定氮法测定蛋白质含量的原 理和方法，SDS测定蛋白质的相对分子质量。除此之外，还要 掌握高速离心机、Q-Sepharose 柱层析法、紫外分光光度计、凯氏定氮 仪、蒸馏装置、 电泳等用法。 这一系列实验需要实验预制作——酵母的自溶，大约 3 天以后， 酵母 胞壁破裂，胞液流出，经多次分别离心得到初提液 A 、热提液 B 和乙醇提取液 C。利用 Q-Sepharose 柱层析法洗脱乙醇提取液 C 得 到洗脱液 D 并在 280nm 处测 D 的吸光值，用葡萄糖测验试纸定性进 行酶活力测试，发现洗穿透峰得到的第 1、2 管酶活力高，从第 3 管以 后吸光值开始下降，且吸光值大的酶活力较大。得到 4 种酶提取液样 品以后，便可以制作葡萄糖标准曲线，进行定量酶活力测定，葡萄糖 标准曲线是一条直线，根据曲线回归方程计算 4 个样品的总活力单位 数和酶回收率，比较计算结果可以知道随着蔗糖酶的不断提纯酶的总 活力单位数和酶回收率都减少。随后用 Folin-酚试剂法测样品中蛋白 质的含量，与用微量凯氏定氮法测定的结果进行比较，后者测出的总 蛋白含量比前者大，并且知道随着酶的提纯，A 、B、C、D4 个样品的 纯化系数升高，比活力升高，总酶活、总蛋白和蛋白回收率却在下降， 其中 A 的蛋白质含量最高，D 的纯化程度最高。最后用 SDS-聚丙烯胺 凝胶 电泳法通过凝胶对样品的筛选分离、考马斯亮蓝的染色、洗脱等 步骤测量蛋白质分子和染料的迁移距离间接测定蔗糖酶的相对分子 质量，得到 2 条蔗糖酶条带，计算的蔗糖酶相对分子质量。 关键词：蔗糖酶；提取纯化；酶活力测定；Folin-酚试剂；微量凯式定 氮法；SDS-聚丙烯胺凝胶 Summary ： To understand the the enzymes preliminary extraction and purification methods, and on this basis to master the principles and methods of determination of enzyme activity; Folin-phenol reagent, trace Kay ceremony will be the principles and methods of nitrogen determination of the protein content, SDSprotein determination of therelative molecular mass. In addition, we must master the use of high-speed centrifuges, Q-Sepharose column chromatography, UV spectrophotometer, Kjeldahl instrument, distillation apparatus, electrophoresis. This series of experiments requires experimental pre-production - yeast autolysis, about three days later, the yeast cell wall rupture, cytosolic outflow to the beginning of extracts A, after repeatedly respectively centrifugal heat extracts B and ethanol e