E花环形成试验.docxVIP

实验二E花环形成试验 实验者：学号：同组者: 一.实验目的 1?掌握T淋巴细胞E花环试验的原理、正常值，了解其方法和用途。 2?熟悉光镜下E花环的形态和计数方法。 二.实验原理 人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞 （SRBC的受体，可与SRBC结合形成花环样细 胞团（即E花环）。由于T细胞的异质性，其中在 4 C放置1h以上，所形成的花环数代表 T 细胞总数，称为总花环（Et花环），而T细胞与SRBC昆合后不经4C作用立即反应形成的花 环数称为活性花环（Ea花环）。 实验用品 实验用品 1?实验试剂：肝素抗凝静脉血、 Hanks液（实验中以过期1640培养基代替）、PBS缓冲 液、淋巴细胞分离液、绵羊红细胞悬液、 0.8%戊二醛、瑞氏染液。 实验器材：吸管、玻片、试管、离心机、显微镜。 实验过程 淋巴细胞悬液的制备 取肝素抗凝血2ml，加入2ml Hanks液稀释液后叠加于 2ml分离液上，离心2000r/min , 20min ;用毛细吸管吸出位于血浆和分离液之间的乳白色单个核细胞层 （如图1所示）,加入 5ml Hanks 液洗 2 次（1500r/min , 10min）,弃上清液，用 Hanks 液配制成 1-2 x 10/ml 细 胞。 图1 图1淋巴细胞分离示意图 绵羊红细胞悬液的配制 将保存于Alsever s液中的绵羊红细胞，用 5-10倍量生理盐水洗 3次（1