2020实验七细胞器的分级分离.pptVIP

细胞器的分级分离 ? 高等植物叶绿体制备 ? 动物细胞线粒体的分离 实 验 目 的 ? 学习分离细胞器的一般原理及方法 实验原理 ? 细胞内不同细胞器的比重和大小都不相同， 在均匀密度介质中不同离心力下沉降的细胞 器组成不同 或 在梯度介质中离心后分布于不 同密度层 ，根据这一原理， 差速离心法 或 密 度梯度离心法 就可将细胞内各种组分分离出 来。 ? 分离流程： 破碎组织（匀浆或研磨）－差速离心或密度 梯度离心分离细胞器－结果检验分析 匀浆（ Homogenization ） ? 低温条件下，将组织放在匀浆器中，加入等 渗匀浆介质 ( 即 0.25mol ／ L 蔗糖一 0.003mol ／ L 氯化钙 ) 进行破碎细胞使之成 为各种细胞器及其包含物的匀浆。 各种匀浆、研磨器 差速离心分级分离 (Fractionation) ? 由低速到高速离心逐渐沉降细胞器。 ? 先用低速使较大的颗粒沉淀，再用较高的转 速将上清液中的小颗粒沉淀下来。 Differential centrifugation High speed ? Low speed 密度梯度离心 （ density gradient centrifugation method ） ? 亦称