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生物化学实验 PCR实验(聚合酶键心  PcR原理 PCR( polymerase chain reaction)即聚合酶链 式反应,是在短时间内大量扩增特定DNA片段的 技术。 ·PCR的起始材料是、个基因或片段的DNA模版 双链DNA公子的互补链经加热后解开形成单 引物(两条合成短单链DNA,分别与模版DNA 序列互补)与互补序列相结合÷四种三磷酸 脱氧核苷酸(GATP:dCTP,dGTP,d 时聚合引物处5至3端合成互补链。多次 循环后,模版DNA列的含量大大增加,用于研 究分析。  5 肟℃退火 72℃引物延伸 第一次循环 模板变性 退火 第二次獅环4 PCR原理示意图  PCR过程 1.变性 denaturation):一般在92~96℃。模板及新合成 的双链DNA都变性成为单链,该步骤一般只需30s~Imin。 2退火( annealing):一般在37~65℃。引物特异地结合 到变性后的单链DNA上。这一步骤一般需30s~mn。 3延伸( extension):温度一般为72℃,时间为1~2min DNA聚合酶根据模板的顺序,在引物3′端接上一个三磷 酸脱氧核苷酸,从而使新合成的互补链不断延伸。PCR产 物一般为几百个碱基对bp),长的可达几十干个碱基对 (kb)。如果需要合成长片段则可适当延长时间。