修订实验三菠菜中的色素提取分离及鉴定.docx

修订实验三 菠菜中的色素提取、分离及鉴定 一、实验目的 1、通过绿色植物色素的提取，了解天然物质的分离提纯方法； 2、熟悉薄板层析的用途及用法； 3、通过柱色谱分离操作，加深了解有机物色谱分离鉴定的原理； 4、从菠菜中提取出叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等色素并加以分离。 二、实验原理 1、叶绿素简介 绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿） 、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色 素。它们在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。 本实验从菠菜中提取上述各色 素，并通过柱层析进行分离。 叶 绿素 存在 两种 结构 相似 的形 式 —— 叶 绿素 a（ C55H72O5N 4Mg ）以及叶 绿素 b （C55H 70O6N4Mg ），其差别仅是 a 中一个甲基被 b 中的甲酰基所取代。它们都是吡咯衍生物 与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素 a 的含量通常是 b 的 3 倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团， 但大的烃基结构使它易溶于醚、 石油醚等一 些非极性的溶剂。 胡萝卜素（ C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即 a-， β-和 γ-胡萝 卜素，其中 β-异构体含量最多，也最重要。在生物体内， β-异构体受酶催化氧化即形成维生 素 A 。目前 β-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素 A 使用，也可作为食品工业中的 色素。 叶黄素（ C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两 倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。 CH 2 CH R H 3C N CH 2CH 3 N Mg 叶绿素 a（R = CH 3） N N H 3C CH3 叶绿素 b（ R = CHO ） CH 2 CO2CH3O CH 2 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 OO CH3 CH 3 CH 3 H 3C R H 3C CH 3 CH 3 H 3C CH 3 R CH 3 CH 3 β-胡萝卜素（ R = H ） 叶黄素（ R=OH ） H3 C CH 3 CH 3 CH 3 CH2OH CH 3 维生素 A 菠菜中各色素的理化性质 β-胡萝卜素，叶黄素，叶绿素 a 和叶绿素 b 四种色素在叶绿体中的含量比约为 2:1:3:1。 (1) 叶绿素 a 有四个甲基与卟吩核连接 (R = -CH 3)。蜡状蓝黑色微小晶体。熔点 o 117～ 120 C。溶于乙 醇、乙醚、丙酮、氯仿、二硫化碳和苯，不溶于石油醚。其乙醇溶液是蓝绿色，并有深红色 荧光。 叶绿素 b 有三个甲基和一个醛基与卟吩核连接 (R = -CHO) 。蜡状蓝黑色微小晶体。 熔点 120～130 oC。溶于乙醇和乙醚，难溶于石油醚。乙醚溶液有亮绿色。其它有机溶剂的溶液通常是绿色 至黄绿色， 并有红色荧光。 可用作肥皂、 脂肪、油蜡、食品、化妆品和医药用的无毒着色剂。 由绿叶用乙醇萃取而制得，也可用化学方法合成。 (3) 胡萝卜素 胡萝卜素有多种异构体，是四萜类化合物。  α-胡萝卜素为红色结晶。熔点  187 oC。旋光 度+385°(c=0.08, 苯 )。溶于乙醚、苯、氯仿。  β-胡萝卜素为红棕色结晶  ,熔点  181 oC，溶于乙 醚、丙酮、苯、石油醚。  γ-胡萝卜素为紫色棱形结晶，熔点  177.5 oC，溶于苯、氯仿。 α-，β- 和 γ-胡萝卜素常共存于许多植物中，  β-胡萝卜素含量最高。  β-胡萝卜素在植物中几乎总是和 叶绿素共存，含量最多的是胡萝卜、棕榈油以及多种绿叶植物。用做食物色素、保健食品， 以及作防晒化妆品成分，还可用作制造维生素  A 的原料。 (4) 叶黄素 又称胡萝卜醇 (carotenol) 。一类羟基类胡萝卜素的衍生物。以乙醚加甲醇精制，得黄色 穗状物。具金属光泽的结晶。熔点 183 oC。不溶于水，溶于油性溶剂。光稳定性较好。主要 与叶绿素、 胡萝卜素共存于绿色植物的叶和花中。 在天然黄色素中，它的价格较贵，可用于食品着色。也有添加于禽饲料中，使禽蛋蛋黄增进黄色。 2、色谱原理 色谱法利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能  （即分配） 的不同， 或其它 亲和作用性能的差异， 使混合物的溶液流经该种物质， 进行反复的吸附或分配等作用， 从而 将各组分分开。 薄层色谱属于固 -液吸附层析的类型。通常是把吸附剂放在玻璃板上成为一个薄层，作 为固定相， 以有机溶剂作为流动相。 实验时， 把要分离的混合物滴在薄层板的一端，用适当 的溶剂展开。 当溶剂流经吸附剂时， 由于各物质被吸附的强弱不同， 就以不同的速率随着溶 剂移动。 展开一定时间后， 让溶剂停止流动， 混合物中各组分就停留在薄