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修订实验三 菠菜中的色素提取、分离及鉴定
一、实验目的
1、通过绿色植物色素的提取,了解天然物质的分离提纯方法;
2、熟悉薄板层析的用途及用法;
3、通过柱色谱分离操作,加深了解有机物色谱分离鉴定的原理;
4、从菠菜中提取出叶绿素、胡萝卜素、叶黄素等色素并加以分离。
二、实验原理
1、叶绿素简介
绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿)
、胡萝卜素(橙)和叶黄素(黄)等多种天然色
素。它们在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
本实验从菠菜中提取上述各色
素,并通过柱层析进行分离。
叶 绿素 存在 两种 结构 相似 的形 式 —— 叶 绿素 a( C55H72O5N 4Mg )以及叶 绿素 b
(C55H 70O6N4Mg ),其差别仅是 a 中一个甲基被
b 中的甲酰基所取代。它们都是吡咯衍生物
与金属镁的络合物,是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素
a 的含量通常是 b
的 3 倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团,
但大的烃基结构使它易溶于醚、
石油醚等一
些非极性的溶剂。
胡萝卜素( C40H56)是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体,即
a-, β-和 γ-胡萝
卜素,其中 β-异构体含量最多,也最重要。在生物体内,
β-异构体受酶催化氧化即形成维生
素 A 。目前 β-胡萝卜素已可进行工业生产,可作为维生素
A 使用,也可作为食品工业中的
色素。
叶黄素( C40H56O2)是胡萝卜素的羟基衍生物,它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两
倍。与胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
CH 2
CH
R
H 3C
N
CH 2CH 3
N
Mg
叶绿素 a(R = CH 3)
N
N
H 3C
CH3
叶绿素 b( R = CHO )
CH 2
CO2CH3O
CH 2
CH 3
CH 3
CH 3
CH 3
OO
CH3
CH 3
CH 3
H 3C
R
H 3C
CH 3
CH 3
H 3C
CH 3
R
CH 3
CH 3
β-胡萝卜素( R = H )
叶黄素( R=OH )
H3 C
CH 3
CH 3
CH 3
CH2OH
CH 3
维生素 A
菠菜中各色素的理化性质
β-胡萝卜素,叶黄素,叶绿素 a 和叶绿素 b 四种色素在叶绿体中的含量比约为 2:1:3:1。
(1) 叶绿素 a
有四个甲基与卟吩核连接 (R = -CH 3)。蜡状蓝黑色微小晶体。熔点
o
117~ 120 C。溶于乙
醇、乙醚、丙酮、氯仿、二硫化碳和苯,不溶于石油醚。其乙醇溶液是蓝绿色,并有深红色
荧光。
叶绿素 b
有三个甲基和一个醛基与卟吩核连接 (R = -CHO) 。蜡状蓝黑色微小晶体。 熔点 120~130
oC。溶于乙醇和乙醚,难溶于石油醚。乙醚溶液有亮绿色。其它有机溶剂的溶液通常是绿色
至黄绿色, 并有红色荧光。 可用作肥皂、 脂肪、油蜡、食品、化妆品和医药用的无毒着色剂。
由绿叶用乙醇萃取而制得,也可用化学方法合成。
(3) 胡萝卜素
胡萝卜素有多种异构体,是四萜类化合物。
α-胡萝卜素为红色结晶。熔点
187 oC。旋光
度+385°(c=0.08, 苯 )。溶于乙醚、苯、氯仿。
β-胡萝卜素为红棕色结晶
,熔点
181 oC,溶于乙
醚、丙酮、苯、石油醚。
γ-胡萝卜素为紫色棱形结晶,熔点
177.5 oC,溶于苯、氯仿。 α-,β-
和 γ-胡萝卜素常共存于许多植物中,
β-胡萝卜素含量最高。
β-胡萝卜素在植物中几乎总是和
叶绿素共存,含量最多的是胡萝卜、棕榈油以及多种绿叶植物。用做食物色素、保健食品,
以及作防晒化妆品成分,还可用作制造维生素
A 的原料。
(4) 叶黄素
又称胡萝卜醇 (carotenol) 。一类羟基类胡萝卜素的衍生物。以乙醚加甲醇精制,得黄色
穗状物。具金属光泽的结晶。熔点 183 oC。不溶于水,溶于油性溶剂。光稳定性较好。主要
与叶绿素、 胡萝卜素共存于绿色植物的叶和花中。 在天然黄色素中,它的价格较贵,可用于食品着色。也有添加于禽饲料中,使禽蛋蛋黄增进黄色。
2、色谱原理
色谱法利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能
(即分配) 的不同, 或其它
亲和作用性能的差异, 使混合物的溶液流经该种物质, 进行反复的吸附或分配等作用, 从而
将各组分分开。
薄层色谱属于固 -液吸附层析的类型。通常是把吸附剂放在玻璃板上成为一个薄层,作
为固定相, 以有机溶剂作为流动相。 实验时, 把要分离的混合物滴在薄层板的一端,用适当
的溶剂展开。 当溶剂流经吸附剂时, 由于各物质被吸附的强弱不同, 就以不同的速率随着溶
剂移动。 展开一定时间后, 让溶剂停止流动, 混合物中各组分就停留在薄
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