基因克隆的酶学基础lyw.pptVIP

2. T4多核苷酸激酶 催化γ-磷酸从ATP分子转移给DNA或RNA分子的5’-OH末端 用于标记核酸分子的5’-末端或是使寡核苷酸磷酸化 3.碱性磷酸酶 细菌碱性磷酸酶（BAP） 小牛肠碱性磷酸酶（CIP） 催化核酸分子脱掉5’-磷酸基团，克隆中防止单酶切产生的线性化载体分子自我连接。CIP容易热失活，且活性比BAP高10-20倍，因此优先选用。 第五节 核酸外切酶 分为单链和双链核酸外切酶 第六节 单链核酸内切酶 S1核酸酶 高度单链特异的核酸内切酶 功能：催化RNA和单链DNA分子降解成为5’单核苷酸，它也能作用于双链分子中的单链区，切断核酸分子 2. Bal31核酸酶 既具有单链特异的核酸内切酶活性，也具有双链特异的核酸外切酶活性。从5’和3’两端同时降解DNA 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是--G↓GATCC--;，限制酶II的识别序列和切点是--↓GATC--。根据图示怎样将目的基因连入载体中？重组后，应该选用哪种筛选标记（Gene I or Gene II）? 练习题1 现有一重组质粒的限制酶谱和克隆到的基因转录方向入图所示： 已知HindIII克隆片段中的BamHI（3kb）片段含有一完整的基因编码区，现要将此3kb的BamHI片段克隆到另一表达载体pB的BamHI位点，如何才能使插入片段