第三章 基因工程的奇迹-教材.pptVIP

DNA的构造元件是核苷酸;A和T数量相当， G和C数目一致 ， 符合碱基当量规则。;3.2 遗传密码;RNA聚合酶与新合成的RNA;真正携带着蛋白质信息的是mRNA！;结构基因：外显子+内含子;几个不同的三联体密码子编码相同的氨基酸，称为密码子的兼并性 。;UAA,UAG,UGA：肽链翻译的终止信号;鬼笔鹅膏 ;3.3 蛋白质生产工厂——核糖体;蛋白质的合成过程 ;3.4 重组（recombination）;3.4.1 质粒——遗传重组的理想载体;质粒：存在于细菌体内并独立于细菌染色体之外的能够自我复制的小的闭合环状的双链DNA。 ;大肠杆菌的质粒;通过结合建立起来一道“桥”来交换质粒 ;细菌具有的抗药性并非是质粒直接赋予的，而是质粒所携带的抗菌素抗性基因表达出的酶能够使那些抗菌素失活，它把这种特性给予了细菌，使细菌也具有了相应的抗生素抗性。 ;质粒的一般生物学特性;;d.质粒有2种不同的复制类型，严紧型质粒（stringent plasmid）和松弛型质粒（relaxed plasmid）。 e.质粒具有不亲和性，也叫不相容性。;目前基因工程技术中使用的大肠杆菌质粒大多是由少数几个野生型质粒构建的：;抗菌素选择原理; 为什么质粒可以作为遗传重组的载体？ ;3.4.2 限制性核酸内切酶和DNA连接酶——分子级别的剪刀和胶水;① 能够识别由4-8个核苷酸组成的具有回文对 称结构的序列 EcoRI的切割位点 EcoRI的识别序列 5’…G C T G A A T T C G A G … 3’ 3’…C G A C T T A A G C T C … 5’ ;② DNA分子有二种断裂类型 一是具有粘性末端的DNA片段。如EcoRⅠ、 PstⅠ;EcoRI产生的5’粘性末端;PstI产生的3’粘性末端;第二种具有平末端的DNA片段。如EcoRⅤ、PvuⅡ 具有平末端的DNA片段不易于重新环化 ;PvuII产生的平头末端;③ 同位酶、同裂酶、同尾酶;同裂酶（isoschizomers）：来源不同的限制酶识别同样的核苷酸靶序列，产生同样的切割，形成同样的末端。;同尾酶（isocaudamers）：来源各异，识别的靶子序列也各不相同，但都产生出相同的粘性末端。 常用的限制酶BamHⅠ、BclⅠ、BglⅡ、Sau3AⅠ和XhoⅡ就是一组同尾酶，它们切割DNA之后都形成由GATC 4个核苷酸组成的粘性末端。;限制性核酸内切酶的命名;DNA连接酶（DNA ligase）: ;T4—DNA连接酶的基本性质;(2) 修复RNA—DNA杂交双链上缺口处的磷酸二酯键;(3) 连接完全断开的两个平头双链DNA分子;3.5 基因技术的第一次尝试——呱呱落地的细菌;TC;TC;“爪蟾-细菌”融合质粒 ;从中得到的更重要的东西：一种基因工程普遍适用的方法——DNA克隆技术得以发展，它能够制造和分析大量高等生物的遗传材料。;3.6 如何获得基因;获得基因的方法： a.将mRNA逆转录为cDNA b.化学合成基因，前提是基因的序列已知;DNA合成仪;3.7 胰岛素 ;1953年，美国科学家F.Sanger证实了胰岛素的结构，它是由两条多肽链组成的，其中一条有21个氨基酸，称为A链，另一条有30个氨基酸，称为B链。 ;人体内胰岛素的合成;人体内胰岛素的合成;35个氨基酸称为C链，它对于胰岛素的空间构象的正确折叠是必需的，能够保证A链和B链在连接时的正确朝向。 ;猪胰岛素与人胰岛素相比，有一个氨基酸序列的差异，人胰岛素B链的末端是苏氨酸，而猪胰岛素B链末端是丙氨酸。 ;胰蛋白酶（trypsin）：一种水解酶;20世纪30年代Hoechst公司生产的猪胰岛素产品广告 ;3.8 第一种基因工程胰岛素的诞生 ;有活性的重组人胰岛素诞生了 ;Humulin （优泌林） ;缺点：A链和B链的连接方向难以确定，二硫键的正确配对率较低，使得每克胰岛素的成本仍高达100美元以上。 ;3.9 从单一大肠杆菌菌株中获得人胰岛素;这正是现在的医药企业制造胰岛素的方法 ;由于C肽的存在，帮助了A链和B链确定正确的连接方向 ，二硫键的正确配对率相应提高 ，每克胰岛素最终产品的成本仅50美元 。;Novolin（诺和灵） ;3.10 利用转基因哺乳动物细胞生产复合蛋白质;最好的基因工程细胞表达系统是哺乳动物细胞（mammalian cell） 最具代表性的是CHO，中国仓鼠卵巢细胞(ChineseHamster Ovary,CHO)。 ;谢谢欣赏