DB13T 2609-2017 禽流感病毒与新城疫病毒二重RT-PCR检测方法.pdfVIP

ICS 65.020.30 B 41 河 北 地 方 标 准 DB 13/T 2609—2017 流感毒与新城毒二RT-PCR 检测方法 2017 - 11 - 22 发布 2017 - 12 - 22 实施 发 布 DB13/T 2609—2017 前 本标准按照GB/T 1.1-2009出则。 本标准由河北农业大学提出。 本标准单位：河北农业大学。 本标准主人：万哲、刘、功、孙国、世山、武现军、刘、张、李文、 李丽敏、云、庆安。 I DB13/T 2609—2017 流感毒与新城毒二RT-PCR 检测方法 1 围 本标准定了流感毒与新城毒RT-PCR检测方法技术求。 本标准用于检测家咽喉拭子、拭子，发和些样品培养物中流感毒与 新城毒。 2 下列略用于本文件。 EB：溴化乙 （ethidium bromide） DEPC：焦二乙 （diethypyrocarbonate） PCR：合式反应 （polymerase chain reaction） RNA：核核 （ribonucleic acid） RT-PCR：反录-合式反应 （reverse-transcription polymerase chain reaction） dNTP：氧核三 （deoxy-ribonucleoside triphosphate） 3 剂或材料 包括LS TRIzol RNA提取剂或各市售毒核提取剂，氯仿，异丙，75%乙，1.0％琼 凝，50×TAE冲液，溴化乙 （EB，10 ug/μL）或核染料，焦二乙 （DEPC）处理 灭双水，DNA分子标准 （100 bp），2×Taq MasterMix。 :氯仿属中毒性，在操作中应在条件下，使用时戴手套和口，不小心沾到应 即冲洗；电泳中用到EB在操作中应戴手套和口。中EB污染物品无害化处理；DEPC 在操作中应在条件下，使用时戴手套和口，不小心沾到应即冲洗。 3.1 LS TRIzol RNA 提取剂或毒核提取剂。 3.2 氯仿:又名三氯甲烷。 3.3 1.0％琼凝，制方法录A 中A.1。 3.4 50×TAE 冲液，制方法录A 中A.2。 3.5 溴化乙 （EB，10 ug/μ L）或核染料，制方法录A 中A.3。 3.6 焦二乙 （DEPC）处理灭双水，制方法录A 中A.4。 3.7 DNA 分子标准 （100 bp）:包含 100 bp、250 bp、500 bp、750 bp、1000 bp、2000bp 几分 子标准。 3.8 反录:M-MLV 反录 （200 U/μ L）或AMV 反录 （10 U/μ L）。