项目五 任务二三_微生物菌种选育-课程.pptVIP

二、分离思路 ;定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离筛选：采用选择性培养基利用分离技术得到纯种目的菌。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。; （一）采样;;2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 3、采土方式：在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。;采取土壤样品要考虑的几个问题;（二）增殖培养;某些细菌的富集条件;（三）培养分离纯化;稀释分离法; 划线分离法——平板划线法;（四）筛 选;;2）摇瓶发酵筛选：将待测菌株进行液体振荡培养，取 发酵滤液进行活力测定。;2、复筛：在初筛的基础上，进一步鉴定有希望菌株的 生产能力强弱的过程。;（五）菌种鉴定;（六）毒性试验;任务三 食品微生物育种技术;一、诱变育种中的几个原则;（一） 出发菌株（original strain）;（二） 菌悬液的制备;（三）诱变剂的选择及处理方法;2. 剂量的选择;3. 诱变处理方法;（四） 中间培养（CM，培养过夜）;（五）突变株的筛选;诱变育种的基本原则：;三. 营养缺陷型突变株的筛选;三种遗传型：;（2）筛选步骤（5步）;①中间培养;③ 营养缺陷型的检出;④ 营养缺陷型的鉴定; a. 不含维生素的酪素水解液或氨基酸混合液 b. 维生素混合液 c. 0.1%碱水解酵母核酸液;以氨基酸缺陷为例进行说明 将18种氨基酸按右表分为6组 特点：每2组只有一种共同物质;（3）营养缺陷型的用途 生产菌 (氨基酸、核苷酸、维生素等高产菌需求)； 研究代谢途径和杂交、转化等遗传规律的遗传标记。 ; 诱变育种的程序： 出发菌株（纯化） 前培养（ CM ，培养至对数期） 菌悬液制备 活菌计数 诱变预备实验（剂量存活率曲线） 诱变处理（相对杀菌率为70-75%，30-70%） 活菌计数 中间培养（CM，培养过夜，克服表型延迟） 突变株分离 初筛 复筛 生产性能试验 菌种（鉴定与）保藏; 二、 杂交育种 ? 发酵工业的优良菌种的选育主要采用诱变育种方法。但是，一个菌种长期使用诱变剂处理之后，其生活能力一般要逐渐下降，例如生长周期延长，孢子量减少，代谢减慢，产量增加缓慢，诱变因素对产量基因影响的有效性降低等。因此，有必要利用杂交育种方法。 杂交育种是指将两个基因型不同的菌株经吻合（或接合）使遗传物质重新组合，从中分离和筛选具有新性状的菌株。 ; 1、杂交育种的目的在于： 1）通过杂交使不同菌株的遗传物质进行交换和重新组合，从而改变原有菌株的遗传物质基础，获得杂种菌株（重组体）； 2）可以通过杂交把不同菌株的优良生产性能集中于重组体中，克服长期用诱变剂处理造成的菌株生活力下降等缺陷； 3）通过杂交，可以扩大变异范围，改变产品的质量和产量，甚至出现新的品种； 4）分析杂交结果，可以总结遗传物质的转移和传递规律，促进遗传学理论的发展。 ; 三、分子育种 在分子水平上，根据需要，用人工的方法取得 供体DNA上的基因，在体外重组于载体DNA上，在转入受体细胞，使其复制、转录和翻译，表达出供体基因原有的遗传性状。;