SD大鼠骨髓间充质干细胞培养作业流程.docVIP

SD大鼠骨髓间充质干细胞培养步骤 姓名：李静 专业：血液内科 学号：10062 导师：赖永榕 研究背景 骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)起源于中胚层，是优质种子细胞，亦是骨髓中存在除造血干细胞外另一类干细胞。因为取材相对方便，易于体外扩增，和免疫原性低等优势，已经在组织工程和移植领域得到了广泛关注。不过骨髓间充质干细胞在骨髓中含量很少，在骨髓中，BMSCs占骨髓有核细胞总数0.001%~0.1%，含量极低。而同时，因为组织工程需要大量种子细胞，从啮齿类动物骨髓分离BMSCs技术上难度限制了很多试验开展。体外分离培养纯度高、活力强、生物特征均一BMSCs对组织工程及细胞体内、体外试验显得至关关键。 研究目标 本试验经过BMSCs黏附特征，应用全骨髓贴壁培养法，建立了一个简便、有效原代培养、增殖和纯化BMSCs方法，观察大鼠BMSCs生物学特征，为后续利用BMSCs诊疗血液疾病研究提供稳定干细胞模型。 一、试验材料和方法 （一）材料和试剂 生后30d雄性SD大鼠，体质量100g，SPF级；DMEM培养基；青霉素、链霉素；胎牛血清；淋巴细胞分离液；0.25%胰蛋白酶；兔抗鼠CD34、CD44、CD45、CD105、CD90荧光抗体；CO2培养箱；倒置相差显微镜；SW-CJ 型生物洁净工作台。 （二）方法 BMSCs原代分离培养：