流式细胞仪操作步骤(facscalibur).pdfVIP

一、开机程序： 1. 检查鞘液桶和废液桶。确认鞘液充满状态（鞘液为鞘液桶 体积的 3/4 位置，可以连续工作 3 个小时左右）、盖紧黑盖、管 道畅通、废液桶有足够空间容纳本批标本排弃的废液。如果要 添加鞘液，要先释放鞘液桶中气压。 2. 依次打开流式细胞仪 FACSCalibur 稳压器、主机开关、 电脑开关，打印机。 3. 气压阀置于加压位置，待流式细胞仪处于 STANDBY 状 态，做 Prime，以排除管路中气泡。 二、运行 FACSComp 软件、检查仪器状况 1. 制备三色标准微球样本。一般情况向 1ml 鞘液（或过滤 PBS）中加入 1 滴质控小微球，也可以根据实际情况调 节浓度。 2. 机器预热 5 min，打开 FACSComp 软件，选择保持路径。 选择所需校正内容，如果使用的微球是新一批产品要输入微球 的批号。 3. 在软件界面左侧 Assay Selection 选项中选择质控类型， 即实验 程中是否需要清洗样品。 4. 上样品，微球溶液上样之前要充分混匀。功能键设置在 “RUN”。 5. 仪器自动检查，并做电压、补偿等设置。 6. FACSComp 软件运行完毕，显示结果通过测试。 7. 做 Set up。 8. 打印校正结果，退出 FACSComp 程序。 备注：在质控 程中，如果提示收集细胞速度慢可以提高细胞收 集速度，但是在调节灵敏度（Sens 时，一定要用“Low”的状态上样，保 证仪器灵敏度的准确。在使用仪器 程中要养成好的习惯，在上样品 程中，仪器保持在“Low”“Standby”状态。 三、样品分析软件：CellQuest Pro 1. 保证机器预热 5 min，打开 CellQuest Pro 软件，选择 A Connect to “联机”。 cquire Cytometer （ 1 在 弹 出 的 界 面 中 的 选择 数 据 存 储 路 径 （Directory 菜单）； （2 对实验样本进行命名； （3 对实验通道进行预设（FSC,SSC,FL1-FL4）。 备注：如果界面被关闭，重新调出步骤： W Show 2. 调出质控模板。 indows Browers Cy Instrumen O tometer t Settings pen B B Instrumen D 图标 D Files t Settings 选择调用的 O Set （ 一 D 质控文件 3. 画图 pen 定要做 one 选择画图工具（一般选择散点图），Inspect 界面会自动 弹出，对几个常用选项进行设定：将散点图选中（用鼠标点击