环境生物学试验参考指导书.docVIP

试验一 一般光学显微镜使用及其对微生物通常形态观察 一、试验目标 1．了解一般光学显微镜结构及其各部分作用。 2．掌握一般光学显微镜正确使用和维护方法。 3．经过低倍镜、高倍镜观察藻类、酵母培养液和新鲜活性污泥中微生物通常形态。 二、试验原理 一般光学显微镜由机械部分和光学部分组成。 图1-1 双目生物显微镜 1．机械部分： （1）镜筒：在镜臂上端空心圆筒，是光线通道。镜筒上端可插入目镜，下面和转换器相连。 （2）转换器：在镜筒下端，是一个能够旋转圆盘。有3~4个孔，用于安装不一样放大倍数物镜。 （3）载物台：载物台是放置标本方块平台，中央有透光孔，载物台上面有玻片夹持器，侧面有移动手轮，可纵向和横向移动标本。 （4）调焦手轮：包含粗调手轮和微调手轮，可使载物台上下升降，调整物镜和标本之间距离。 2．光学部分： （1）目镜：放在镜筒上，配有10倍（10×）、16倍（16×）两种。 （2）物镜：装在转换器孔上，有低倍镜（4、10）、高倍镜（40）和油镜（100），是显微镜中最关键部分。多种镜头上全部刻有放大倍数和数值孔径（）及所要求盖玻片厚度等关键参数。物镜性能由数值孔径决定，而且还依靠于物镜分辨率。 （3）聚光器：由聚光镜和孔径光阑组成。聚光镜作用是把光线聚集在标本上，增强照明度。孔径光阑是用来调整对比度，使物镜和聚光器数值孔径相符合。当孔径光阑开启到物镜出瞳70~80%时，就能够得到足够对比度良好图象。假如开得太大，超出物镜数值孔径，就会产生光斑；假如开得太小，则分辨率下降，降低物像清楚度。 （4）电光源：在显微镜下部，提供观察标本时所用光源。 三、试验器材 1．一般光学显微镜（双目生物显微镜） 2．载玻片、盖玻片若干 3．玻璃棒、滴管 4．滤纸、擦镜纸 5．藻类、酵母培养液，新鲜活性污泥 四、试验方法 １．低倍镜操作 （１）首先把目镜放入镜筒上，将物镜（4、10、40、100）旋紧在转换器上。 （2）标本放在载物台上，用玻片夹持器挟紧。并用移动手轮移动所要观察目标物到圆孔正中央。 （３）打开电源开关，调整聚光器，使光路对准载物台中央光孔，光亮度要适宜。 （４）旋动转换器，将10倍物镜对准光孔。 （5）用粗调焦手轮使物镜和标本距离至最小，同时要侧脸观察，以免压坏标本玻片或损坏物镜。 （6）调整瞳距。 （7）眼睛靠近目镜观察，左（右）手用移动手轮轻轻移动玻片夹持器，右（左）手用粗调焦手轮将载物台下移（向内旋转调焦手轮），假如见到目标物，但不是十分清楚，再用细调焦手轮调整，至目标物清楚为止。 （8）假如粗调焦手轮旋得太快，超出焦点，必需从第（5）步重调，不要在正视目镜情况下调粗调手轮，预防没有把握旋转使物镜和载玻片相撞碰坏。 注：观察时两眼同时睁开，双眼不感觉疲惫。 2．高倍镜操作 （1）使用高倍镜前，先用低倍镜观察（操作方法同低倍镜操作）。 （2）旋动转换器，换用高倍镜（40）观察，假如高倍镜触及载玻片应立即停止旋动，说明原来低倍镜观察没有调准焦距，目标物没有找到，须用低倍镜重新调整。假如调整正确，换用高倍镜时基础能够看到目标物，假如模糊，用微调焦手轮稍微调整一下就清楚可见。 3．微生物形态观察 取一洁净载玻片，用滴管或玻璃棒在培养液内沾一滴菌液，用洁净盖玻片覆盖在滴液上（注意不要有气泡）即成标本片，用低倍镜和高倍镜观察。统计微生物形态特征。 四、试验统计及结果 表1-1微生物形态观察统计 项 目 放大倍数 低倍镜观察 高倍镜观察 五、思索题 1．镜检标本时，为何要先用低倍物镜观察？ 2．画一个细胞结构示意图。 试验二 微生物计数（酵母菌显微镜直接计数） 一、试验目标 1．了解并掌握常见血球计数板结构。 2．学会通常显微镜直接计数方法。 二、试验原理 测定微生物数量方法很多，通常采取有显微镜直接计数法和平板计数法。 镜检计数法适适用于多种含单细胞菌体纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大酵母菌或霉菌孢子可采取血球计数板；通常细菌则采取彼得罗夫·霍泽（Petroff Hausser）细菌计数板。两种计数板原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，能够使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。 血球计数板是一块特制厚载玻片，载玻片上有4条槽而组成3个平台。中间平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网（图2-1）。每个方格网共分9大格，其中间一大格（称为计数室）常被用作微生物计数。计数室刻度有两种：一个是大方格分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一个是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。不过不管计数室是哪一个结构，它们全部有一个共同特点，即每个大方格全部由400个小方格组成（图2-2）。 每个大方格边长为1mm，则每一大方格面积为1