植物组织中可溶性糖含量测定方案.docVIP

植物组织中可溶性糖含量的测定—蒽酮比色法 一、原理 糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在630 nm处有最大吸收，在150 μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、淀粉、纤维素），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。 二、仪器、试剂和材料 1.仪器：电子天平，电热恒温水浴锅，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1) 蒽酮浓硫酸试剂：1.0 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中，贮藏于棕色瓶中 (2) 浓硫酸 3.材料：草莓新鲜果实 三、实验步骤 1、标准曲线的制作 1、1 1 %蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘干至恒重，精确称取1.000g。加蒸馏水溶解，转入100mL 1、2 100ug/mL蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，加水至刻度。取10mL刻度试管11支，从0~10分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。 管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100ug/mL蔗糖标准液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（mL） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蔗糖浓度（μg/mL） 0 20 40 60 80 100 1、3 按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96℃沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后取出至室温下放置15min，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖浓度 2、可溶性糖提取 称取具有代表性样品的可食部分100 g，放人组织捣碎机中，迅速捣成匀浆（或研磨），称取0.50 g浆状样品，共三份。分别放入3支试管中，加入10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤到50 3、显色测定 吸取稀释后的样品提取液1.0mL至10mL刻度试管中，重复三次，按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96℃沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后在室温下放置15min，在630 nm处 四、结果计算 C × V总 × D 样品含糖量（%）= ───────────── × 100% W × V测 × 106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）， V总——提取液总体积（mL）， V测——测定时取用体积（mL）， D——稀释倍数， W——样品重量（g）， 106——样品重量单位由g换算成μg的倍数 参照李合生植物生理生化试验原理和技术 植物组织中可溶性糖测定流程 取蒽酮1g，溶于50mL乙酸乙酯中，贮藏于棕色瓶中（蒽酮乙酸乙酯试剂） ↓ 取1.000g蔗糖加蒸馏水溶解，转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，定容（1 %蔗糖标准液） ↓ 取上述1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，定容（100ug/mL蔗糖标准液） ↓ 取10mL刻度试管11支，从0~10分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。 管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100ug/mL蔗糖标准液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（mL） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖含量（μg） 0 20 40 60 80 100 ↓ 按顺序依次向试管中加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，每管均保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以糖含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 ↓ 称草莓果实100 g，制成匀浆，称取0.10~0.30 g浆状样品，共三份。分别放入3支试管中，加入5~10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次) ↓ 吸取样品提取液0.5mL至10mL刻度试管中，重复三次，加蒸馏水1.5mL，按顺序依次向试管中加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，每管均保温1min，取出后自然冷却至室温，在630 nm处测其吸光度。