薄层色谱的操作.pptx

薄层色谱的操作 1.方法原理 薄层色谱是一种微量分析的分离过程，它将样品点在以玻璃板或铝、塑料等片材为载体的多孔吸附剂薄层的固定相上, 利用流动相在特定的展开室中将混合物中的组份推移到不同距离处，在色谱展开整个过程中，样品的成份受到正反不同 的力的作用。 流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产 生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。 由于样品组份与流动相和固定相之间的相互作用力程度不同，整个毛细管流动过程中分离运动都在进行。基于这点，TLC 系统（流动相和固定相）必须与样品很好地匹配。 用显色试剂处理，许多组份可在日光或紫外灯光下检视。色谱可用肉眼或使用光密度计和照相机记录或影像系统方法来 评价。 2. 薄层板 2.1 手工自制板 玻璃板的要求:用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，最好使用厚薄 1~2mm 的优质平板玻璃，普通窗玻 璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用。玻璃板反复使用时，应注意经常 用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的光洁是保证薄层板质量的最基本要求 制作方法:除另有规定外，将 1 份吸附剂加适量的水（如 1 份硅胶G 一般加 3 份水），在研钵中用研杵沿一个方向 小心研磨至成均匀的有适当粘稠度的胶浆,立即倾入涂布器中,均匀地向前推进涂布在玻璃板上;或按照不同涂布器的规定 操作涂布;涂布好的薄层板于室温下在水平台上晾干,再在规定的温度(一般为105℃~110℃)下烘约30 分钟活化,贮于干燥 器中备用。薄层板的厚度一般为 0.25~0.5mm.。 商品化供应的预制板和高效板 板的尺寸 20x20cm 10x20cm 20x10cm 10x10cm 图 1 不同的板尺寸 TLC/HPTLC 预制板有不同的规格供应。常用的尺寸为 20 x 20，10 x 20，20 x 10，或 10 x 10 cm。使用的规格取决于 TLC 或HPTLC 的类别和样品的数目。 2.2.3 TLC/HPTLC 板的预洗及活化;一般来说，色谱板应用溶剂如氯仿-甲醇(8:2)，甚至用更强的洗脱溶剂的混合物进行预洗。具体操作可通过空白色谱展开 来实现。 色谱板预洗完后,应在 105°C 加热 1 小时进行干燥，再在室温下置放至少 2 小时（需采取保护措施以防止实验室空气中 的污染物重新附着在其上面，如放置在空的干燥器中）。 3. 样品点样 点状点样和条带状点样 每次点样前，TLC/HPTLC 板应在正常光线下和紫外灯下用肉眼检查薄层的损伤情况和杂质，只有无损伤、清洁的 TLC/HPTLC 板方可使用。 样品可进行点状或条带状点样。要想获得最佳的薄层分辨率，必须保证移行方向中的起点要小，常规的 TLC 薄层点状点 样每次点 0.5 至 5 微升，相比之下，HPTLC 薄层最大点样量为 1 微升。点样量较大的样品可使用自动化装置点样，喷 雾成条带状是一种可以点样量大而同时又能促成最有效分离的点样方法。在常规操作过程中，人工点样一般使用微量毛 细管（0.5/1/2/3 和 5 ?l），点样时毛细管必须完全充满和完全排空，要以垂直方向小心接触 TLC/HPTLC 板面，不要损 伤薄层，受损的薄层会导致溶剂不规律地流动而在色谱上产生失真的 TLC 谱带。 人工点样建议使用Nanomat。它点样位置精确并安全，使薄层免于受损。用适当的介质干燥 Nanomat 也可用作单个量 的多次点样。 样品体积大于 5 ?l，通常用如 Linomat 或 Automatic TLC Sampler III 的方法用氮气喷雾成窄条。若（就是）要求点状样 品点样，Linomat 和Automatic TLC Sampler III 应将条长度设定在 1 至 2 mm。 样品点样位置 起点的最佳位置如图 2 和 3 所示。起点下缘的最小距离 b 取决于溶剂量。两个起点之间的距离 c 必须令平行移行的主成 份不会相互触及。点状点样时原点的直径应小于或等于 3mm（高效板原点的直径应更小）,条带的长度 d 由点样样品体 积或样品的种类和相对于板的尺寸点样的数目来决定。到板侧边的距离 a 必须足够大以避免分离区失真变形（见图 2 和 3）。 图 2： 斑状样品点样的一般点样位置（a = 20mm, b = 10mm, c =两起点之间的距离。）;3;4;5;6;7;8;9;10