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样品存贮及相关设备 实验室基本仪器技术课程 实验室样本保存的种类 生物大分子（蛋白、核酸） 细菌、酵母 血液、组织 其他（试剂、组织液等） 细胞（贴壁、悬浮） 生物大分子保存的主要因素 温度（加速反应） 水分（加速反应和霉变 ） 光线 （光化作用） 空气（水分、氧气、微生物） PH值（稳定范围） 时间 （保存期限） ⑴空气：空气的影响主要是潮解、微生物污染和自动氧化。空气中微生物的污染可使样品腐败变质，样品吸湿后会引起潮解变性，同时也为微生物污染提供了有利的条件。某些样品与空气中的氧接触会自发引起游离基链式反应，还原性强的样品易氧化变质和失活，如维生素C、巯基酶等。 ⑵温度：每种生物大分子都有其稳定的温度范围，温度升高10℃，氧化反应约加快数倍，酶促反应增加1～3倍。因此通常绝大多数样品都是低温保存，以抑制氧化、水解等化学反应和微生物的生成。 ⑶水份：包括样品本身所带的水份和由空气中吸收的水份。水可以参加水解、酶解、水合和加合。加速氧化、聚合、离解和霉变。 ⑷光线：某些生物大分子可以吸收一定波长的光，使分子活化不利于样品保存，尤其日光中的紫外线能量大，对生物大分子制品影响最大，样品受光催化的反应有变色、氧化和分解等，通称光化作用。因此样品通常都要避光保存。 ⑸样品的pH：保存液态样品时注意其稳定的pH范围，通常可从文献和手册中查得或做实验求得，因此正确选择保存液态样品的缓冲剂的种类和浓度就十分重要。 ⑹时间：生化和分子生物学样品不可能永久存活，不同的样品有其不同的有效期，因此，保存的样品必须写明日期，定期检查和处理。 DNA保存 ???? 短期保存，加无菌水或TE缓冲液，4°或－20° 。 长期保存，刚提取好的DNA直接保存到乙醇里，放－20°或者-70°。需要用的时候，再离心后，弃去乙醇，加水或TE溶解即可。????? DNA本来就是酸性，所以需要弱碱性环境保存，如果用中性或者酸性环境保存时间长容易降解。保存时间长会降解。所以还是要尽快的利用了。 有文献报道高纯DNA的最佳保存条件是4度，提纯的DNA放在4°一段时间（数周-数月）都没问题。但是长期保存建议-20°或-70° ，并且浓度不能太低。??????? RNA保存 ?? 保存RNA应该尽量低温。 ?? 若要长期保存,需沉淀下来后置于无水乙醇冻在-70度,用的时候再离心下来除去无水乙醇,用DEPC水溶解。 为了防止痕量RNase的污染，从富含RNase的样品（如胰脏、肝脏）中分离到的RNA需要贮存在甲醛中以保存高质量的RNA，为了增加贮存RNA样品的稳定性，可以将RNA溶解在去离子的甲酰胺中，存于-70℃。 RNA即使是放在-80度下也会降解，所以最好的保存方法是将RNA逆转成cDNA后保存。????? 提取的RNA保存在DEPC处理的水中，加入RNAse抑止剂，在-80度保存2个月，应该是可以保证不降解的。最好是反转录后保存。????? 蛋白质保存 选择什么样的贮存方法取决于该蛋白的稳定性和你打算保存多长时间以及下一步你打算如何利用。 注意事项：蛋白溶液应避免极端的pH（强酸or强碱），同时也不能接近其等电点的pH。另外，还应该避免其他物质的掺入。 如果保存时间在24h以内，大多数蛋白可以放置到4℃。如果保存时间在24h以上，应该考虑避免蛋白溶液长菌，可以事先过滤一下或者加入抑菌的物质（如叠氮化钠）。  ???? 蛋白质有什么比较实用的保存方法? 1.冻成干粉，低温保存。 2.甘油+防腐剂，低温保存，甘油浓度5%~50%，防腐剂一般选择NaN3（叠氮化钠），但对于氧化酶类的蛋白，不能使用NaN3，会影响蛋白活性，推荐不加防腐剂，或者改加PMSF（苯甲基磺酰氟）。 如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究：叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的细胞色素电子转运。 大多数的蛋白、RNA酶抑制剂都是致癌或潜在致癌的，因为它有可能阻碍体内蛋白、RNA的正常更替。 PMSF通过与蛋白质的serine残基结合而达到抑制serine蛋白酶的作用。  检测用的粗蛋白，全蛋白当然可以分装低温保存，制备级最好是冻干，-80度存放，但经常使用的（比如抗血清、纯化的酶）最好采取公司商品化酶类的保存方法，就是50%甘油+低温，即保证了低温，甘油又保证了整个体系不会结晶，避免了反复冻融，而且甘油有稳定